جداسازی سلول های اپیدرم با استفاده از آمیزه ی مناسبی از آنزیم اکتینیدین میوه ی کیوی و آنزیم تریپسین به جای آنزیم های معمول جداسازی

آنزیم های پروتئولیتیک، خصوصا کلاژناز و تریپسین برای هضم ماتریکس خارج سلولی و عمدتارشته های الاستیک به ویژه کلاژن های بافت همبند در برگیرنده ی بافت ها مورد استفاده قرار می گیرند. کلاژناز و تریپسینبه سختی از منابع باکتریایی یا جانوری بدست می آیند. یافتن پروتئاز جایگزین کلاژناز و تریپسین در منابع گیاهی که راحت تر و با هزینه ی کمتر تخلیص و آماده ی استفاده شود، از اهمیت ویژه ای برخوردار است. در این مطالعه که به صورت مشترک بین دانشگاه رازی و مرکز تحقیقات بیولوژی پزشکی در سال 1389 انجام شد از آمیزه ی مناسبی از آنزیم تریپسین و آنزیم اکتینیدین که به وفور در میوه ی کیوی یافت می شود و در واقع عمده ترین پروتئین کیوی است ، برای جداسازی سلول های اپیدرم استفاده کردیم. برای خالص سازی اکتینیدین از چند مرحله سانتریفوژ و به دنبال آن اوالترافیلتراسیون و نهایتا ستون کرماتوگرافی تعویض یونی استفاده شد.بعد از انجام خالص سازی به منظور بررسی خلوص نمونه از الکتروفورز SDS-PAGE استفاده شد.اکتینیدین خاص شده در غلظت های مختلف برای سلول های اپیدرم در دما ی 37 درجه و در زمان های مختلف در مقایسه با آنزیم کلاژناز-H، آنزیم تریپسین و آمیزه ی مناسب از اکتینیدین و تریپسین استفاده شد. جداسازی در بسیاری از غلظت ها با موفقیت انجام شد، غلظت و زمان بهینه در مقایسه با آنزیم های مرسوم اشاره شده تعیین گردید و بهترین حالت گزارش شد.

Keywords:

اپیدرم , اکتینیدین , کلاژناز-H , تریپسین