همسانه سازی ژن زیر واحد آلفا فیکوسیانین در ناقبل بیانی

هدف: ف کیوبیلی پروتئین ها،پروتئین های جذب کننده نورهستندکهدرسیانوباکترها و دوگروه ازجلبک هاوجوددارند.ف کیوسیانین رنگدانه آبیرنگی است که جزء این خانواده است. این رنگدانه دارای فعالیت های متنوعزیستی است وکاربردهای گوناگونی درصنعت غذایی،آرایشی و داروییداشته ومی توان ازآن به عنوان پروب های فلورسنت درهیستوشیمیوم کیروسکوپ فلورسنت استفاده کرد واز این روکی گزینه مناسبجهت مصارف صنعتی است.هدف از این مطالعه شناسائی،جداسازیوهمسانه سازی ژن زیرواحدآلفا ف کیوسیانین درناقل بیانی بودتا امکانتولیدف کیوسیانین به صورت پروتئین نوتر یکب درباکتری E.coli فراهمگردد.روش: باتوجه به توالی ژن زیرواحد آلفا در بانک ژن ونقشه ناقل +- pET43.1a ، آغازگرهای لازم جهت تکثیرطراحی گردید.استخراج ژنومازسیانوباکتر Spirulina platensis انجام شدوبه عنوان الگو در PCRمورداستفاده قرار گرفت.ناقل بیانی ومحصول تکثیر شده موردنظرباآنزیمهای برشی NdeI ,NotI برش داده شدندوبانسبت مناسب درکنارآنزیمT4 DNA Ligase واکنش اتصال انجام گردیدوپس ازعملترنسفورماسیون،باکتری اشرشیاکلی BL21(DE3 (تراریخته برروی محیطگزینشگرحاوی آنتی بیوت کی آمپی سیلین کشت داده شد.بابررسی کلونیهای ظاهر شده برروی محیط گزینشگربااستفاده ازکلونی PCR ، هضمآنزیمی وتع یین توالی،حضور ژن زیرواحدآلفا درناقل بیانی موردبررسی قرارگرفت.نتیجه: تکثیراختصاصی با پرایمرهای ژن زیرواحدآلفا ف کیوسیانین بررویژل آگارز باند 488 bp را نشان دادو تکثیر ژن راباطول صحیح تا ییدنمود.بررسی کلونی ها بااستفاده ازکلونی PCR ،هضم آنزیمی پلاسمیدهایحاصل ازکلونی های مثبت وتع یین توالی پلاسمید های همسانه سازیشده،حضور ژن زیرواحدآلفا درناقل بیانی + pET-43.1a را اثبات نمود.بحث: سیستم بیانی + pET-43.1a باداشتن پروموتر T7 کیی ازقویترینسیستم های بیانی جهت بیان بالای پروتئین نوتر یکب موردنظردرمیزبانحاوی کی نسخه کرومزومی از RNA پلی مراز T7 است.سنتزکاملف کیوسیانین وابسته به سنتزهمزمان زنجیره آلفاوبتا وف کیوبیلین واتصالصحیح ف کیوبیلین به این دوزنجیره است.ازاین رو تولیدنوتر یکب اینف کیوبیلی پروتئین نسبت به پروتئین های دیگرمشکل است.باتوجه بهکاربردهای گوناگون واهمیت ف کیوسیانین،درصورت همسانه سازی ژنهای دیگرآن درآینده می توانیم به ف کیوسیانین نوتر یکب کامل دستیابیم.

Keywords:

ژن زیرواحد آلفا فیکوسیانین , اسپیرولینا , همسانه سازی pET43.1a