تشخیص سریع اسپور عامل سیاه زخم به روش مولکولی

زمینه و اهداف : باسیلوس آنتراسیس باکتری اسپور دار، گرم مثبت، هوازی و عامل بیماری سیاه زخم است . در سال های اخیر از این باکتری در حملات بیوتروریستی استفاده شده است . اسپور باسیلوس آنتراسی س نسبت به عوامل فیزیکی و شیمیایی بسیار مقاوم می باشد. برای تشخیص سریع اسپور این باکتری به روش های مولکولی، به اسنخراج ژنوم با شکستن اسپور نیاز می باشد . هدف از این مطالعه تشخیص سریع مولکولی DNA باسیلوس آنتراسیس به روش Multiplex PCR با شکستن سریع اسپور به روش فیزیکی در زمان بسیار کوتاه و بدون استخراج ژنوم است. روش بررسی: اسپورباکتری غیر بیماریزای سیاه زخم یا سویه استرن سویه واکسن باسیلوسیی آنتراسیس توسط سیستم BioSpec Products, In. Mini Bead Beater‐8 با استفاده از بید های 1/0 میلی متر در 1000 دور در دقیقه شکسته و استخراج شد. تشخیص به روش Multiplex PCR با استفاده از 3 جفت پرایمر صورت گرفت . PCR سه قطعه DNA با اندازههای مورد انتظار را تولید نمود که در ژل آگاروز الکتروفورز آنالیز شد. جهت تعیین حد تشخیص و اختصاصیت از رقتهای مختلف اسپور به روش CFU/ml و باکتری های دیگر همین جنس نیز استفاده گردیدنتیجهگیری: نتایج بهینه سازی نشان داد شکستن به روش فیزیکی با استفاده از ذرات شیشه و دستگاه Bead MillHomogenization از سرعت لازم برخوردار میباشد. بعد از شکست در مدت ۳ دقیقه، نیازی به استخراجDNAنیست. با این روش، ما توانستیم به طور سریع، اختصاصی و با حساسیت بالا اسپور باکتری باسیلوس آنتراسیس را در نمونهها تشخیص دهیم

Keywords:

تشخیص , باسیلوس آنتراسیس , اسپور , Multiplex PCR