استفاده از فرایند شوک حرارتی به عنوان روشی سریع جهت شکستن دیواره سلولی ریزجلبک ها به منظور استخراج مواد ژنتیکی

ریزجلبک های سبز، جلبک های تک سلولی بسیار ساده ای هستند که کاربرد زیادی در مطالعات زیست شناسی دارند. در این میان ریز جلبک اسپیرولینا به دلیل ارزش بالای تغذیه ای آن توجه زیادی را به خود جلب کرده است. مطالعات مولکولی بر روی این میکرواورگانیسم ارزشمند، نیازمند استفاده از یک روش مناسب جهت تهیه ماده ژنتیکی میباشد. در این مطالعه به منظور دستیابی به روش مناسب از نظر بازه زمانی استخراج، میزان هزینه و دسترسی به DNA ژنومی با کیفیت و کمیت مناسب آزمایشی طراحی گردید. بافر استخراج شامل (Tris صد میلی مولار، EDTA پنجاه میلی مولار، CTAB3% و NaCl هشتصد میلی مولار با PH 8.5) تهیه گردید. جهت اعمال شوک حرارتی به منظور شکستن دیواره سلولی و استخراج ماده ژنتیکی به طور متوالی از غوطه ور سازی تیوبهای محتوی سوسپانسیون ریز جلبک در ازت مایع و حمام آب گرم 37 درجه سانتیگراد استفاده شد. کیفیت و کمیت DNA استخراجی با روش اسپکتروفتومتری، الکتروفورز روی ژل آگارز و واکنش زنجیره ای پلیمراز با پرایمرهای نیمه تصادفی ارزیابی شدند. همچنین نتایج توالی یابی حاصل از تکثیر ناحیه ژنی ریبوزمی که با آغازگرهای I27 انجام گرفت تایید کننده کیفیت مناسب DNA ژنومی استخراج شده با روش مورد مطالعه بود.

Keywords:

اسپیرولینا , بافر استخراج , شوک حرارتی , DNA ژنومی