بررسی مدت زمان و دمای انکوباسیون بر میزان بیان و حلالیت S100A8 نوترکیب

Publish Year: 1393
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: Persian
View: 763

متن کامل این Paper منتشر نشده است و فقط به صورت چکیده یا چکیده مبسوط در پایگاه موجود می باشد.
توضیح: معمولا کلیه مقالاتی که کمتر از ۵ صفحه باشند در پایگاه سیویلیکا اصل Paper (فول تکست) محسوب نمی شوند و فقط کاربران عضو بدون کسر اعتبار می توانند فایل آنها را دریافت نمایند.

  • Certificate
  • من نویسنده این مقاله هستم

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این Paper:

شناسه ملی سند علمی:

CIGS13_0012

تاریخ نمایه سازی: 7 بهمن 1393

Abstract:

به عنوان یکی ازS100A8 زیرواحدهای سازنده هترودایمر کالپروتکتین در بسیاری از فرآیندهای وابسته به التهاب و سرطان ایفای نقش می کندهدف: تولید پروتئین محلول و نوترکیبS100A8با ساختار طبیعی و عملکردی، می تواند گامی در جهت تشخیص مسیرهای مولکولی وابسته به این پروتئین در فرآیندهای سرطانی و التهابی و پیشبرد درمان آنها باشد روش: به این منظور، تولید زیر واحد پروتئینیS100A8در پلاسمیدpET15bنوترکیب و میزبانE.coli BL21(DE3 با استفاده ازغلظت 1 میلی مولارIPTGالقاء گردید. پس از 3،2,1,4 ساعت انکوباسیون در دو دمای 37 و 18 درجه سانتیگراد، بیان کمی و کیفی پروتئین ازطریقSDS PAGEمورد بررسی قرار گرفت. با توجه به توالی هیستیدین موجود بر روی پروتئین، فرآیند تخلیص با استفاده از ستون نیکل و غلظت های مختلف از ایمیدازول انجام شدنتیجه تحقیق: پس از 3،2،1,4 ساعت انکوباسیون باکتریها در دمای 37 درجه سانتیگراد، بیشترین میزان پروتئین محلول، با باند 8 کیلودالتونی، پس از گذشت 3و 4 ساعت از انکوباسیون، بر روی ژل مشاهده گردید و حداقل زمان لازم برای انکوباسیون، 3 ساعت دردمای 37 درجه سانتیگراد بدست آمد که افزایش این مدت تاثیری بر میزان پروتئین محلول نداشت. همچنین کاهش دمای انکوباسیون به18 درجه سانتیگراد ، پس از گذشت 20 ساعت از انکوباسیون باکتریها، باند مشخصی را از بیان پروتئین محلول بر روی ژل نشان نداد و کاهش دما همراه با افزایش مدت انکوباسیون کاهش تولید پروتئین محلول را در پی داشت. بنابراین برای تولید پروتئین محلول، بهینه دما، 37 درجه سانتیگراد و بهینه مدت زمان انکوباسیون، 3 ساعت پس از القاء بدست آمد. در نهایت با استفاده از غلظتهای 150 و 200 میلی مولار از ایمیدازول، بیشترین و خالص ترین پروتئین محلول، در فرآیند تخلیص حاصل شد.

Authors

فاطمه نعمتی نیکو

کارشناس ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی تهران

نعمت الله غیبی

دانشیار فیزیک پزشکی مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی قزوین

کوروش گودرزوند چگینی

استادیار بیوشیمی مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی قزوین