انتقال ژن الآسپارژیناز 2 به ریشه مویین سیبزمینی به منظور تولید پروتئین نوترکیب

امروزه استفاده از گیاهان تراریخت، به عنوان سیستم بیان پروتئینهای نوترکیب دارویی، بسیار مورد توجه قرار گرفته است. یکی ازروشهای تولید پروتئینهای نوترکیب، انتقال ژنهای آنها به سلولهای گیاهی و ایجاد ریشه مویین از این سلولها با استفاده از روشهایانتقال ژن و کشت بافت گیاهی میباشد. آنزیمها کاربرد وسیعی در صنعت، پزشکی، داروسازی و درمان دارند. الآسپارژیناز، یکی از آنزیمهای دارویی مهم به شمار میرود که در مراحل شیمی درمانی، جهت درمان سرطان، به ویژه در درمان لوسمی لنفوبلاستیک حاد ALL در کودکان مورد استفاده قرار میگیرد. در این تحقیق، ژن الاسپاراژیناز 2ansBاز باکتریE.coli YG001 پروکاریوت جداسازی شد و نهایتا چون باید به گیاه (یوکاریوت) منتقل و بیان میگردید، در نتیجه توالی آن بر اساس ترجیح کدونی سیبزمینی تغییر یافت. توالی مذکور به طور مصنوعی سنتز و در ناقل بیانpBI121همسانهسازی گردید. ریشههای تراژن و شاهد در سطوحRNA ،DNA و پروتئین مورد بررسی قرار گرفتند. وجود قطعهbp155 حاصل از تکثیر ژنansBتوسط آغازگرهای اختصاصی، درcDNA و DNAریشههای مویین تراریخت و عدم وجود آن در ریشههای شاهد، حاکی از انتقال این ژن به ژنوم ریشههای تراریخت و نیز بیان این ژن درسطحRNAبود. برای ارزیابی فعالیت پروتئین نوترکیب تولید شده، عمل استخراج پروتئین از ریشههای تراژن انجام گرفت و آنالیز بدست آمده فعالیت بیشتری را نسبت به پروتئین شاهد نشان داد

Keywords:

الآسپارژیناز , سیبزمینی , Agrobacterium rhizogenes