کلون و بیان ترشحی آنزیم دی ایزوپروپیل فلوروفسفاتاز (DFPase) در B. subtilis WB600

آفتکشهای ارگانوفسفره برای کنترل آفتها ی کشاورزی استفاده میشوند و 38 % کل آفت کش های جهانی را شامل می شوند. این ترکیبات استیل کولین استراز را مهار می کنند که منجر به تجمع استیل کولین و در نهایت نقص در اندام و مرگ می گردد. یکی از آنزیمهایی که دارای ویژگی سوبسترایی وسیع برای تجزیه ارگانوفسفاتهاست آنزیم دی ایزوپروپیل فلوروفسفاتاز میباشد که در مغز ماهی مرکبLoligo vulgarisیافت شده است. تیمار ترکیبات ارگانوفسفره با استفاده از سوشهای مهندسی شده حاوی آنزیمDFPaseروش مناسبی برای حذف این ترکیبات میباشد.. در این مطالعه به منظور تسریع تجزیه ترکیبات ارگانوفسفره بیان ترشحی آنزیمDFPaaseبرای اولین بار در میزبانB. subtilis WB600بررسی شد. این مدل از بیان آنزیم باعث میگردد محل آلوده مورد نظر سریعتر و با ایمنی بالاتر رفع آلودگی شود. ژنdfpaseبه کمکPCRازوکتور pET28-inaV/N-dfpaseتکثیر یافتمحصولPCRبدست آمده در وکتورpWB980 ساب کلون گردید. سوش باکتریاییB. subtilis WB600مستعد با وکتور نوترکیب ترانسفرم شدند. بررسی بیان ترشحی پروتئین در محیط سوپرریچ به کمک تکنیکSDS PAGEباند پروتئینی حدود 35 کیلودالتون را پس از 72 ساعت گرمادهی در دمای 35 درجه و دورrpm150 نشان داد. مطالعه فعالیت سوپرناتانت به روشFPLCو مانیتورینگ فلوراید آزاد شده از تجزیهDFPبه کمک دستگاه یون مترU/l1600 فعالیت را نشان داد. نتایج به دست آمده حاکی از کارآمدی این آنزیم جهت تجزیه زیستی ترکیبات سمی ارگانوفسفره می باشد

Keywords:

ترکیبات ارگانوفسفره , B. subtillis WB600 , بیان ترشحی , دی ایزوپروپیل فلوروفسفاتازDFPase