انتقال و بیان پلاسمید حاملHPV16 E7توسط پپتیدهای نفوذ کننده درون سلولی

یکی از راهکار های توسعه ژن درمانی موفق ایجاد سیستم های انتقال ژن کارا و غیر سمی است. نفوذپذیری پایین غشای پلاسمایی و هسته سلول نسبت بهDNAدو مانع اصلی در استفاده از این مولکول های درمانی است ایجاد واکسن هایDNAای مؤثر و بی خطر بر علیه ویروس پاپیلومای انسانیHPV در کنترل سرطان دهانه رحم بسیار مؤثر است. هدف از این مطالعه معرفی یک فرمولاسیون بر مبنای پپتیدهای کاتیونی برای انتقال مؤثر و بیان بالای پلاسمید کدکننده انکوژنHPV16 E7در شرایط آزمایشگاهی استساختارDNAیی کدکننده ژنE7 ویروس پاپیلومای انسانی نوع 16 (pEGFP-E7)در مقیاس زیاد با خلوص بالا تهیه شد. کمپلکسهای پپتید/DNA پلاسمیدی در نسبت های مختلفN/Pتهیه شد. برای ارزیابی کارایی ترانسفکشن این سیستم انتقالی، جمعیت سلول های ترانسفکت شده از نظر بیان پروتئین گزارشگرGFPبا فلوسایتومتری ارزیابی شد. برای تأیید بیان پروتئینGFPو انکوپروتئینE7 وسترن بلات انجام شد.سطح بالای بیانGFP-E7در سلول های ترانسفکت شده با کمپلکس پپتید/DNAتوسط وسترن بلات مشخص شد. باندهای 38 و 50 کیلودالتون مرتبط با بیانGFP-E7 با استفاده از آنتی بادی منوکلونال بر علیهHPV16 E و 7 GFPدر سلول های ترانسفکت شده مشخص شد نتایج بیان بالایGFP وانکوپروتئینE7نشان میدهد که این سیستم انتقالی در محیط ترانسفکشن و در حضور سرم پایدار بوده و ازموانع سلولی در مسیر انتقال ژن عبور کرده است. در مطالعات آینده می توان از این سیستم انتقالی مؤثر و غیر سمی برای اهداف انتقال ژن استفاده کرد.

Keywords:

سیستم انتقالی ژن , پپتیدهای نفوذ کننده درون سلولی , پلاسمید کد کنندهHPV16 E7