میلاد علیزاده - دانشگاه شهید بهشتی، دانشکده مهندسی انرژی و فناوریهای نوین، گروه بیوتکنولوژی
حسین عسکری - دانشگاه شهید بهشتی، دانشکده مهندسی انرژی و فناوریهای نوین، گروه بیوتکنولوژی
مسعود سلطانی نجف آبادی - موسسه تحقیقات اصلاح و تهیه نهال و بذر کرج
اسماعیل رجایی - دانشگاه شهید بهشتی، دانشکده مهندسی انرژی و فناوریهای نوین، گروه بیوتکنولوژی

باکتری بیماریزای گیاهیXanthomonas citri subsp. citri به عنوان عامل شانکر باکتریایی مرکبات محسوب میشود که به طور شدیدی تولید همه ارقام مرکبات را کاهش میدهد. در نتیجه دو پدیده رشد و تقسیم بیش از حد سلولی، شانکر مرکبات با علائمی چون جوشهایآبسوخته و زخمهای دوار و چرکدار مشخص شده و بر روی هر سه اندام برگ، گل و میوه ظاهر خواهند شد. یکی از مولکول های تنظیمی قابل ملاحظه در کنترل تغییرات پس از رونویسیmicroRNAبالغ با قابلیت تنظیم سطح رونوشت ژنها در پاسخ به متغیرهای مکان و زمان است. در طی دههی گذشته microRNA ها به عنوان عناصر اصلی در برهمکنش گیاه-پاتوژن شناخته شدهاند. جداسازی و شناسایی این مولکولها بوسیله روشهای مرسوم RT-PCRبه دلیل اندازه کوتاه و مقدار کم آنها در سلول دچار مشکل است Stem-loop RT-PCRبه عنوان روشی حساس و اختصاصی میتواند برای تشخیصmiRNA های بسیار حفاظت شده گیاهان غیرمدل مورد استفاده قرار گیرد. در این تحقیق سه توالی احتمالی miRNA بر اساس همولوژی انتخاب و همولوگهای احتمالی آنها در گیاه لیمو ترش (Citrus × limon) با استفاده از روشstem-loop RT-PCRبا موفقیت تکثیر شدند. علاوه بر این بیان در طی زمان اینmiRNAهای احتمالی در پاسخ لیمو ترش به دو استرین متعلق به گونههای جنسXanthomonas ردیابی شد. نتایج نشان داد که در نتیجه آلودگی استرینهای مختلف در یک گیاه، سطوح بیان ژن به طور متفاوتی در طی زمانهای مختلف پس از آلودگی تغییر میکند. همچنین مشاهده شد که 6 ساعت پس از ایجاد آلودگی زمان حیاتی در برهمکنش لیمو ترش و Xanthomonas است. الگو های بیانی متفاوتmir159 در پاسخ به استرینهای مورد مطالعه حاکی از نقش موثر آن در ایجاد پاسخ فوق حساسیت دارد. اگرچه نشان داده شد کهmir167 ظاهراً نقش موثری در ایمنی اولیه گیاه تحت آلودگی استرینA دارد اما دارای الگویی غیر پاسخگو در طی پاسخ فوق حساسیت است. بر اساس الگوهای بیانیmir398 ما پیشنهاد کردیم که اثر متغیر زمان بر روی بیان این microRNA بیش از اثر نوع استرین مهاجم است.

لیمو ترش، شانکر باکتریایی مرکبات ، microRNAبالغ ، stem-loop RT-PCR ، بیان در زمان