مرضیه قنبری جهرمی - دانش آموخته دکتری دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
پژمان آزادی - استادیار بخش کشت بافت و انتقال ژن، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران

استخراج RNA در گیاهانی که حاوی مقادیر بالای پلی ساکارید، ترکیبات فنلی و رنگدانه هستند بسیار مشکل است. از آنجایی که کیفیت و کمیت استخراج در موفقیت آنالیزهای مولکولی مثل RT-PCR بسیار حائز اهمیت است، بهینهسازی روشهای مختلف استخراج RNA به صورت ساده و سریع از بافتهای سخت گیاهی مثل گلبرگ ضروری به نظر میرسد. پروتکلهای رایج برای استخراج RNA اغلب طولانی و خسته کننده هستند و معمولا برای گیاهان سخت کیفیت پایینی دارند. در این پژوهش بهینه سازی استخراج RNA با کیفیت بالا از بافت گلبرگ در راستای مطالعه و توالییابی ژنهای موثر در تولید رنگ آبی در ارقام زینتی بومی کشور انجام شد. استخراج RNA از گلبرگ چهار گل زینتی شامل بنفشه، اطلسی سفید، رز محمدی و زنبق انجام گردید. پنج روش استخراج RNA و اعمال تغییراتی در دو روش رایج شامل روش Hot borate و Trizol انجام شد. در بین نمونه ها گلبرگ گل رز سختترین نمونه برای استخراج RNA با کمترین غلظت RNA (میانگین 500 نانوگرم در میکرولیتر) بود. استخراج RNA از گلبرگ گل رز تنها از دو روش استخراج RNA به دست آمد که بهترین نمونه استخراجی مربوط به روش تغییریافته چهارم Trizol (اضافه کردن نمک لیتیوم کلراید) بود. استخراج RNA با استفاده از این پروتکل نه تنها خلوص بالایی (نسبت A260/280 دامنه 1/85 الی 2/1) داشت بلکه از عملکرد نسبتا بالایی (غلظت 1000 نانوگرم در هر میکرولیتر) نیز برخوردار بود. بیشترین میانگین غلظت RNA ا (2200 نانوگرم در میکرولیتر) از گلبرگ گل اطلسی و پس از آن به ترتیب از گل بنفشه ( 1100 نانوگرم در میکرولیتر) و زنبق ( 650 نانوگرم در میکرولیتر) به دست آمد.

استخراج Trizol ،RNA، گلبرگ، رز