شناسایی کلستریدیوم سپتیکوم به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)

هدف: تأیید تشخیص کلستریدیوم سپتیکوم با استفاده از پرایمرهای اختصاصی به روش (PCR) در بین کلستریدیوم های جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه ارومیه. طرح: مطالعه آزمایشگاهی. نمونه ها: 28 سویه کلستریدیوم جدا شده از صد نمونه مدفوع گوسفندی منطقهارومیه. روش: نمونه برداری از مدفوع تازه گوسفندی، انجام آزمایشات استاندارد میکروب شناسی برای جداسازی کلستریدیا، استخراج DNA از سویه ها، انجام PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده از قطعه ژنی آلفا- توکسین. نتایج: ازمون بر روی ت مامی 28 سویه به اصافه سویه واکسنی کلستریدیوم سپتیکوم به عنوان شاهد مثبت و سه تیپ B, C, D از کلستریدیوم پرفرنژنس به عنوانشاهد منفی انجام گردید. پس از انجام عملیات استخراج DNA، با پرایمر اختصاصی قطعه ای از ژن همولیزین کلستریدیوم سپتیکوم (توکسی آلفای باکتری) عملیات PCR صورت پذیرفت. هر شش سویه کلستریدیوم سپتیکوم به اضافه سویه واکسن در ژل آگارزباند 270 جفت بازی را از خود نشان دادند که به عنوان قطعه مورد نظر در ژن همولیزین کلستریدیوم سپتیکوم تلقی گردید. تمامی گونه های دیگر کلستریدیای استفاده شده، با این پرایمر منفی بودند. نتیجه گیری: با توجه به نتایج بدست آمده، می توان پیشنهاد استفاده از روش PCR با پرایمرهای اختصاصی برای تشخیص سریع و اختصاصی کلستریدیوم سپتیکوم را توصیه نمود. مجله دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، (1385)، دوره 61، شماره 1، 50-47.

Keywords:

واکنش زنجیره ای پلیمراز , همولیزین , آلفا- توکسین , کلستریدیوم سپتیکوم