طراحی و تولید رده سلولی بیان کننده ژن های 5'UTR و NS3 از عامل اسهال ویروسی گاوها (BVDV) به منظور ارزیابی کارایی روش های درمانی علیه این ویروس

زمینه مطالعه: عامل مولد اسهال ویروسی گاو (BVDV) عامل مضرات اقتصادی، بهداشتی قابل توجهی در مزارع پرورش گاو است. به دلیل ناکارآمدی نسبی برنامه های ریشه کنی این ویروس، در سال های اخیر برای مبارزه با آن تدابیر متعدد ضد ویروسی نظیر ژن درمانی به فراوانی به کار گرفته شده است. یکی از روش های ارزیابی کیفیت این تدابیر، استفاده از این ابزارها ضد ویروسی در ردههای سلولی اختصاصی بیان کننده آن زن از طریق القای بیان ژن توسط پلاسمید حامل یا عفونت باوکتورهای ویروسی است.هدف: اینمطالعه با هدف تهیه یک رده ی سلولی بسیار بیان کننده بخشی از ژنوم BVDV برای ارزیابی کارآمدی روش های درمانی و پیشگیرانه علیه این ویروس انجام شد. روش کار: بدین منظور پس از کشت سویه استاندارد NADL از BVDV و استخراج vRNA، افزوده سازی ژن های کد کننده 5’UTR و NS3 از ژنوم این ویروس و سپس کلونینگ این قطعات ژنی در پلاسمید لنتی ویروسی pWPI-linker B در فرادست ژن GFP انجام شد. پس از تأیید کلونینگ، لنتی وکتورهای حاوی BVDV-NS3 و BVDV-5’UTR در سلول های 293T با استفاده از سیستم packaging نسل سوم تولید شدند. در مرحله بعد سلول های MDBK بیان کننده دائمی 5’UTR و NS3 با استفاده از عفونت بالنتی ویروس های بیان کننده BVDV-NS3 و BVDV-5’UTR تولید گردیدند. نتایج: کارآمدی عفونت بالنتی و کتورهای حامل ترانس زن با آزمون های مشاهده مستقیم با میکروسکوپ فلورسنت، وسترن بلاتینگ و RT-PCR بررسی و با گروه کنترل مقایسه گردید و حضور و بیان ژن های مورد نظر تأیید شد. نتیجه گیری نهایی: نتایج نشان دهنده تولید موفقیت آمیز رده ی سلولی MDBK بسیار بیان کننده این دو زن از BVDV بود و لنتی وکتورها به دلیل بیان طولانی مدت و پایدار ژن تا چندین نسل سلولی و امکن عفونی نمودن بسیاری از رده های سلولی نسبت به سایر وکتورهای ویروسی ارجحیت دارند.

Keywords:

, BVDV , عفونت , لنتی وکتور , MDBK , ترانسفکشن