شقایق افراز - بخش صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری گروه پژوهشی بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه شاهرود
سعید امین زاده - بخش صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
ناصر فرخی - گروه پژوهشی بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه شاهرودگروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شاهرود

پکتات لیاز، آنزیمی است که موجب برش حذفی اتصالات گلیکوزیدی در پلی گالاکتورونیک اسید و تولید الیگوگالاکتورونات-های اشباع نشده می شود. پکتات لیازهای قلیایی، دارای کاربرد گسترده ای در فرآوری الیاف گیاهی و منسوجات هستند. تاکنون ژن این آنزیم از گونه‎های مختلفی از میکرو ارگانیسم ها استخراج و همسانه سازی شده است. در این پژوهش پس از‎ استخراج DNA ژنومی از باکتری کوهنلا و طراحی پرایمر، قطعه‎ی ژنی به طول bp 1200 جدا شد و در وکتور pTZ57R/T کلون گردید. هضم آنزیمی دو وکتور pTZ57R/T وpET26b توسط آنزیم‎های برشی Nco I وXho I انجام و واکنش لیگاسیون بین قطعه ی ژنی تخلیص شده و وکتور pET26b صورت گرفت و محصول الحاق در میزبان بیانی E.coli BL21(DE3) ترانسفورم گردید. جهت تولید پروتئین نوترکیب پس از اطمینان از انجام لیگاسیون با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی، بیان با القاء IPTG (M1/0) در دمای 25 درجه سانتی‎گراد به مدت 6 ساعت صورت گرفت. مشاهده‎ی باند حاصل از تولید پروتئین در KDa 41 تاییدی دیگر بر صحت کلون‎سازی و فعالیت پروموتر می‎باشد.

پکتات لیاز، پروتئین نوترکیب، پلی گالاکتورونیک اسید