بررسی روشهای انجماد و ذخیره سازی رویان گاو

رایج ترین روش انجماد مورد استفاده برای رویان گاو، قرار دادن رویان (در مرحله بلاستوسیت) در محلول غلیظ گلیسرول (1/4 مول در محلول بافری فسفات که در آن حدود 15 درصد سرم گاو و 4 میلی گرم در میلی لیتر آلبومین سرم گاو اضافه شده باشد) در دمای اتاق به مدت 20 دقیقه است. سپس درجه حرارت پایوت را از دمای اتاق به صفر درجه و سپس به 4- تا 7- درجه سانتی گراد کاهش می دهند. در این مرحله تشکیل یخ به صورت کنترل شده صورت می گیرد. انجماد با سرعت 0/3 درجه سانتی گراد در دقیقه با استفاده از تانک نیتروژن مایع مخصوص ادامه می یابد تا به دمای 35- درجه سانتی گراد برسد. لیبو [3] حداکثر زنده ماندن رویان گاو را پس از یخ گشایی، در سرعت انجماد 0/6 درجه در دقیقه ذکر کرده است. برای یخ گشایی پایوت رویان بهتر است پس از خارج کردن از تانک به مدت 10 ثانیه در هوای معمولی گرم شود و سپس به آب سرد منتقل شود تا از دمای پایین به دمای معمولی برسد. پس از یخ گشایی باید مواد محافظت سرمایی وارد شده به رویان خارج شوند. روش یخ گشایی یک مرحله ای: محققان برای آسان تر کردن تکنیک یخ گشایی پایوت رویان و خارج کردن مواد محافظت کننده روش یک مرحله ای را طراحی کردند. در این روش، رویان منجمد یخ گشایی شده را از محیط حاوی محافظت کننده (پایوت) به ظرف حاوی محلول غیر قابل نفوذ هیپرتونیک (مانند ساکارز) منتقل می کنند تا مواد محافظت کننده داخل سلولی به بیرون انتشار یابد. سپس رویان در محیط ایزوتونیک به حیوان گیرنده منتقل می شود. روش انجماد سریع و خیلی سریع: ویلادسن[5] طرح تغییر روش انجماد مرحله ای و آهسته را به روش سریع ارائه داد. در این روش زمان و امکانات کمتری لازم است. انجماد سریع روشی است که در آن پس از تعادل رویان با مواد محافظت کننده، دمای پایوت را به دمای زیر صفر رسانیده و سپس در ازت مایع منجمد می کنند. در این روش رویان به پایوت 0/25 میلی لیتری حاوی مواد محافظت کننده منتقل و در دمای 21- درجه سانتی گراد به مدت 35 دقیقه قرار داده می شود و سپس وارد ازت مایع می شود.

Keywords:

رویان , انجماد , گاو