Escherichia coli تحت عوامل بیانی کلروپلاستی در aadA بررسی بیان ژن

دستکاری های ژنتیکی کلروپلاست در گیاهان عالی امتیازات ویژه ای نسبت به دستکاری ژنتیکی هسته دارد. برای رسیدن به این منظور نیاز به طراحی و ساخت وکتورهای خاصی است. یکی از اجزاء اساسی وکتورهای کلروپلاستی، وجود توالی های جانبی احاطه کننده چپ و راست برگرفته از ژنوم کلروپلاستی (پلاستوم) گیاه مورد نظر به عنوان ناحیه هدف ورود، می باشد. این توالی ها از به صورت انتهای صاف، اتصال یافتند، سپس pUC وکتور 19 PvuII تکثیر و سپس در سایت برشی PCR پلاستوم اسفناج توسط تکثیر گردید و در وسط توالی های احاطه کننده اتصال PCR به همراه پروموتر و ترمیناتور ویژه کلروپلاستی توسط aadA ژن منتقل شده و باکتری های تراریخته بر روی محیط DH5α یافت. سازه حاصله با روش شوک حرارتی به باکتری اشریشیاکلی سویه هضم ،colony PCR حاوی آنتی بیوتیک آمپی سیلین 75 میلی گرم در لیتر، انتخاب شدند. با استفاده از تکنیک های مختلف آنزیمی، توالی یابی و هم ردیف سازی آن در بانک اطلاعاتی حضور این توالی در ناقل تایید شد. همچنین برای بررسی اطمینان از 75 و غلظت های مختلف μg/ml باکتری حاوی سازه، روی محیط کشت حاوی آمپی سیلین ، aadA بیان کاست ژنیاسترپتومایسین کشت گردید. ظهور کلونی های باکتری بر روی پلیت های حاوی آنتی بیوتیک نشان دهنده مقاومت زیاد باکتری تحت کنترل عناصر تنظیم کننده کلروپلاستی در میزبان aadA ها به آنتی بیوتیک استرپتومایسین که به علت بیان ژن اشریشیاکلی است، می باشد.

Keywords:

E. coli , اسفناج , عناصر تنظیم کننده کلروپلاستی , وکتور کلروپلاستی