اثر جهشهای نقطهای بر ویژگیهای ساختاری و کاتالیتیک آنزیم پراکسیداز نوترکیب (HRP)
Publish place: 7th national biotechnology congress of I.R. iran
Publish Year: 1390
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: Persian
View: 795
This Paper With 6 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
NBCI07_0302
تاریخ نمایه سازی: 29 شهریور 1394
Abstract:
در زمینههای مختلف بیوتکنولوژی از جمله کیتهای تشخیصی، بیوسنسورها و (HRP) آنزیم پراکسیداز ترب سیاه کوهی بیوکاتالیستها کاربرد فراوانی دارد و به همین دلیل همواره موضوع تحقیقات گسترده بوده است. افزایش کارایی کاتالیتیک وپایداری آنزیم دامنهی کاربردهای آن را گسترش میدهد. امروزه این آنزیم برای مصارف تجاری از ریشهی گیاه ترب سیاه کوهی استخراج میشود. استفاده از میزبان هترولوگ برای کاهش قیمت هزینهها و سهولت تولید و تخلیص آنزیمهایی بادر میزبان هترولوگ و بویژه میزبان HRP کاربردهای گسترده ضروری بهنظر میرسد. از مشکلاتی که بر سر راه بیان پروکاریوتی وجود دارد، عدم گلیکوزیلاسیون میباشد که بر پایداری آنزیم در مقابل دما و پراکسید هیدروژن اثر میگذارد. در این پژوهش دو رزیدوی آسپاراژین در جایگاههای 268 و 13 ، که از نقاط گلیکوزیلاسیون در آنزیم وحشی محسوب میشوندبرای جهشزایی انتخاب شدند. این دو رزیدو بهترتیب با 83 % و 65 % دردسترسپذیری سطحی با آسپارتیک اسید جایگزین شدند. هر دو جهشیافته که در میزبان اشریشیاکولی بیان شدند، افزایش پایداری در مقابل دما ( افزایش در نیمهعمر از 20 دقیقه در آنزیم نوترکیب بدون جهش تا 32 و 67 دقیقه در جهشیافتههای جایگاه 13 و 268 ) و پراکسید هیدروژن (تا سه و kcat برابر) را نشان دادند. علیرغم فاصلهی دور هر دو رزیدو از جایگاه فعال، تغییرات قابل توجهی در پارامترهای سینتیکیمشاهده شد. مطالعات فلوریمتری و فروکش فلورسانس توسط اکریلامید، تغییر چندانی در انعطافپذیری ساختار پروتئین Km گواه بر اتصال کمتر این ترکیب به پاکتهای هیدروفوبی در نمونههای جهشیافته بود. ،ANS نشان ندادند ولی بررسی اتصالایجاد جهشیافتهی دوگانه، اثر افزایندهی هر دو جهش را نداشت.
Keywords:
Authors
صدیقه اسد
دانشگاه تهران، پردیس علوم، گروه بیوتکنولوژی
خسرو خواجه
دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده علوم پایه، گروه بیوشیمی
ناصر قائمی
دانشگاه تهران، پردیس علوم، گروه بیوتکنولوژی
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :