ایجاد موتانت های فاقد فعالیت هسته یخ (INA-) در جدایه Xanthomonas translucens با استفاده Tn5

در طبیعت برگ های گیاهان به وسیله تعدادی از باکتری ها پوشیده شده اند که حضور این باکتری ها سبب تشکیل یخ در دماهای بسیار بالاتری نسبت به گیاهان استریل می گردد. امروزه به کمک زیست فناوری می توان با تغییر در فلور میکروبی منطقه که شامل کاهش میکروارگانیزم های مهم توزیع کننده ی هسته های یخی می باشد، درجهت پیشگیری از سرما زدگی اقدام نمود. در این روش با تخریب مستقیم یا غیر مستقیم ژن عامل هسته یخ، جدایه های فاقد هسته یخ بدست می آیند که در همه صفات به جز قابلیت تشکیل هسته یخ مشابه و ایزوژن جدایه ی والد دارای هسته یخ هستند و با تکثیر وانتقال به روی گیاه، با والد وحشی خود به رقابت می پردازند. هدف از بررسی حاضر ایجاد موتانت های - INA در باکتری زانتوموناس ترنسلوسنس با هدف جلوگیری ازخسارت های فراوان ناشی از سرما زدگی می باشد، در این مطالعه از ترانسپوزون Tn5 و الکتروپوریشن برای ایجاد جهش استفاده گردید. پس از القاء جهش کلیه جدایه های موتانت حاصله و جدایه مادری، به منظور ردیابی ژن هسته یخ( inaX) به کمک پرایمر طراحی شده وارد واکنش زنجیره ای پلی مراز شدند. جدایه مادری دارای ژن هسته یخ بود و بخش ژنومی مورد نظر را تکثیر کرد اما جدایه های موتانت درآزمون ژنتیکی ردیابی ژن ، اکثرا فاقدژن هسته یخ بودند و تغییرات چشمگیری در این ژن نسبت به جدایه های مادری کسب کردند و با غیر فعال شدن ژن ina فنوتیپ جهش یافته INA- را نشان دادند و در نهایت این جدایه ها روی گیاه لوبیاحساس به سرما مورد ارزیابی قرار گرفتندو دو ایزوله به عنوان موتانت های فاقد هسته یخ (INA-) معرفی گردیدند.

Keywords:

جهش , زانتوموناس ترنسلوسنس , Tn5 , ژن هسته یخ (ina)