تشخیص سریع قارچ Verticillium dahliae عامل بیماری پژمردگی ورتیسلیومی درختان زیتون با استفاده از تکنیک LAMP

یکی از عوامل اصلی کاهش عملکردزیتون، وجود طیف وسیعی از عوامل بیماری زای قارچی است که با حمله به آن باعث افت کمی و کیفی محصول می شوند. در بین این عوامل، قارچ Verticillium dahliae سهم مهمی در ایجاد خسارت در روی محصول زیتون در اغلب مناطق زیتون کاری کشور به خود اختصاص داده است. روش های مولکولی متعددی جهت تشخیص این قارچ در درختان آلوده به کار گرفته شده است که اغلب مبتنی بر PCR هستند. تکنیک LAMP روش جدیدی جهت تشخیص بسیاری از عوامل بیماری زا به خصوص ویروس های آلوده کننده گیاهی می باشد که در آن تمام واکنش ها، می تواند تحت شرایط هم دما انجام شود و نیازی به تجهیزات گران قیمت ندارد. در این پژوهش برای اولین بار از تکنیک LAMP برای تشخیص دقیق و سریع قارچ عامل پژمردگی و رتیسلیومی زیتون استفاده شد. برای این منظور، بعداز کشت قارچ در محیط PDA، استخراج DNA ژنومی انجام شد. سپس با طراحی آغازگرهای اختصاصی واکنش لمپ و بهینه سازی شرایط واکنش، قارچ عامل بیماری شناسایی گردید. درادامه دقت و حساسیت این تکنیک با روش مبتنی بر Nested-PCR مقایسه گردید. نتایج این پژوهش نشان داد که روش LAMP در مقایسه با روش Nested-PCR از سرعت، دقت و حساسیت بیشتری در تشخیص قارچ برخوردار است و می تواند روش جایگزین مناسبی برای روش فوق درغربالگری درختان آلوده به قارچ درباغات زیتون باشد.

Keywords:

قارچ ورتیسلیوم , واکنش LAMP , واکنش Nested-PCR