سحر صباغ زاده - کارشناس ارشد سلولی و مولکولی، بخش بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتوپاستور ایران
زهرا جوانمیرپور شیرزادی - کارشناس ارشد سلولی و مولکولی، بخش بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران
پریسا بخشی - کارشناس ارشد بیوتکنولوژی، بخش بیوتکنولوژی پزشکی، انیستیتو پاستور ایران
حسن میرزاحسینی - استادیار، بخش بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران

اهداف: در این تحقیق، استفاده از Signal sequence مورد توجه قرار گرفته است با توجه به اینکه هیرودین به طور طبیعی فاقد Signal sequence است، در نظر گرفته شده است که با الحاق این بخش به ژن هیرودین و بیان پروتئین هیرودین، مکان ترشح پروتئین به فضای پری پلاسمیک با محیط خارج سلول و با سیتوپلاسم مشخص گردد و پروتئین محلول به دست آید. مواد و روش ها: ترادف 66 نوکلئوتیدی واریانت HV3 ژن هیرودین تهیه و داخل یک وکتور بیانی قوی (خانواده pET) انتقال داده شد. برای تسهیل درتخلیص پروتئین از His-tag در انتهای N ژن استفاده شد. سیگنال پپتید pelB در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و بیان توسط سویه OrigamiB(DE3) اندازه گیری شد. در نهایت محصول تولیدی در سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت اندازه گیری شد. نتایج: با روش SDS-PAGE بیان پروتئین دیده شد و با وسترن بلاتینگ بیان پروتئین هیرودین تایید شد. نتایج نشان داد مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمی بیان شده و مقدار کمی پروتئین به محیط کشت نیز ترشح شد.

سیگنال پپتید pelB،| اشرشیا کولی، هیرودین، دسیرودین