بررسی نقش سیگنال پپتید PhoA بر بیان پری پلاسمیک دسیرودین (هیرودین) در E.coli

هدف:با توجه به مزیت های دارویی هیرودین و ارجحیت آن به هپارین به عنوان داروی ضد انعقاد، تولید آن در کشور ضروریست. هیرودین پروتئینی با 65 تا 66 اسید آمینه که از غدد بزاقی زالو ترشح می گردد و بازدارنده ی قوی ترومبین است. بیان بالای هیرودین برای میزبان ایکلی توکسیک بوده، لذا از سیستم های ترشحی استفاده شد. مواد و روش ها: ترادف 66 نوکلئوتیدی واریانت HV3 ژن هیرودین تهیه وبه یک وکتور بیانی قوی (خانواده pET) انتقال داده شد. برای تسهیل در تخلیص پروتئین از His-tag در انتهای N ژن استفاده شد. سیگنال پپتید PhoA در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و بیان توسط سویه ای BL21(DE3)،اOrigamiB(DE3) اندازه گیری شد. در نهایت محصول تولیدی در سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت اندازه گیری شد. نتایج و بحث: با روش SDS-PAGE، بیان پروتئین دیده شد و با وسترن بلاتینگ تایید شد. بیان پروتئین در هر دو سویه تقریبا به یک اندازه بود. نتایج نشان داد مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمی بیان شده و مقدار کمی پروتئین به محیط کشت نیز ترشح شد.

Keywords:

سیگنال پپتید PhoA , | اشرشیا کولی , هیرودین , دسیرودین