بررسی بیان پروتئین ESAT -6 مایکوباکترویوم بویس در سطح RNA و بررسی قابلیت تحریک ایمنی سلولی در موش با روش تکثیر لنفوسیتی

بیماری سل گاوی که توسط مایکوباکتریوم بویس ایجاد می شود همچنان به عنوان یک معضل اقتصادی در کشورهای مختلف و به منزله یک خطر جدی برای بهداشت عمومی در کشورهای درحال توسعه مطرح می باشد . یکی از راههای کنترل بیماری سل گاوی واکسیناسیون می باشد که در این راستا واکسن های نوترکیب به دلیل مزایای خاص بسیار مورد توجه می باشند . ژن ESAT-6 که کننده ی پروتئین ایمنیزای 6 کیلو دالتونی ESAT می باشد که به عنوان یکی از آنتی ژن های مهم این میکروارگانیسم جهت تولید واکسن های نوترکیب مورد هدف می باشد . در این مطالعه ابتدا کل ژنوم باکتری مایکوباکتریوم بویس استخراج و ژن ESAT-6 با پرایمرهای اختصاصی کلونینگ توسط PCR تکثیر و خالص شد سپس با ایجاد سرهای مکمل در ژن خالص شده ESAT با استفاده از آنزیمهای برشی در وکتور pcDNA3.1 قرار گرفت . صحت پلاسمید نو ترکیب با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید . سپس پلاسمید نوترکیب به صورت داخل ماهیچه ای به موش های BALB/c تزریق و پس از نمونه گیری از بافت ماهیچه کل RNA استخراج و کمیت و کیفیت RNA تعین گردید در موشهای ایمن شده واکنش RT-PCR با پرایمرهای اختصاصی مربوط به آنتی ژن مورد نظر جهت تایید بیان زن در بافت ماهیچجه انجام شد . که نتایج حاکی از بیان پلاسمید نوترکیب آنتیژنیک در سطح RNA بود. همچنین بر اساس تست MTT ، تحریک لنفوسیتی صورت پذیرفت و گروه های موش حساس شده با PPD شاخص تحریکی بالایی از خود نشان دادند .

Keywords:

ایمنی سلولی , مایکوباکتریوم بویس , تحریک لنفوسیت , ژن ESAT-6 , PPD