همسانه سازی ژن زنجیره سنگین آنتی بادی ضد ویروس هاری در ناقل ویروسی به منظور بیان در گیاه

در دوه دهه گذشته، سیستم های بیان گیاهی به عنوان بستری مناسب برای تولید پروتئین های درمانی توسعه یافته اند . گیاهان نسبت به دیگر سیتم های بیانی، از جمله سیتسم های باکتریایی و حیوانی دارای مزایای قابل ملاحظه ای می باشند . ناقلهای ویروسی گیاهی استراتژی نوید بخشی را برای بیان موقت ژن در گیاهان ارائه می کنند . دستکاری ژنتکی در این سیتسم های بیان گذار، در مقایسه با بیان پایدار پروتئین های نوترکیب ، بسیار آسان تر می باشد . همچنین این سیستم ها می توانند پروتئین های نو ترکیب را بسیار سریع تر تولید کنند . در این پژوهش ، یک وکتور بیانی بیانی از الحاق ژن اپتیمایز شده زنجیره سنگین آنتی بادی ضد ویروس هاری (Hea) و PVX (یک وکتور ویروسی گیاهی) ، بمنظور بیان موقت این ژن در گیاه ، ساخته شد. سپس توالی های Kozak و KDEL به ترتیب به انتهای 5 و 3 ژن Hea افزوده شدند . آغازگرهای مناب با توجه به توالی های دو انتهای ژن Hea و محل های برشی مناسب طراحی شدند . در نهایت ژن Hea پس از تکثیر توسط PCRدر ناقل ویروسی PVX همسانه سازی شد . ناقل بیانی حاوی ژن مورد E. coli تکثیر و سپس به باکتری Agrobacterium tumefaciens منتقل گردید . نتایج همسانه سازی این ژن با تفستفاده از روش های مولکولی ColonyPCR هضم آنزیمی و در نهایت توالی یابی مورد تایید قرار گرفت . بدنی ترتیب اگروباکتریوم نو ترکیب به منظور انتقال ژن Hea با روش اگرواینفیلتر اسیون به گیاه تنباکو، آماده سازی شد .

Keywords:

ناقل ویروسی گیاهی , آنتی بادی ضد هاری , همسانه سازی , انتقال ژن , اگرواینفیلتر اسیون