طراحی و ایجاد موتاسیون در ژن wbk A بروسلا آبورتوس S19 به روش Overlap Extension PCR

زمینه مطالعه: ایجاد موتاسیون در جایگاه اختصاصی م یتواند یکی از رو شهای کارآمد جهت بررسی ویژگی و خواص تنظیمی ژ نهای گوناگون باشد. ﺮﺑو ﻮﻠﺳز از ﻢﻬﻣ ﻦﯾﺮﺗ ﺎﻤﯿﺑریهای ﯽﻧﻮﻔﻋ ﺮﺘﺸﻣک ﻦﯿﺑ ا ﺎﺴﻧن و دام ا ﺖﺳ ﻪﻛ ﺮﺠﻨﻣ ﻪﺑ بروز ﺭﺮﺿهاﻯ ﻯﺩﺎﺼﺘﻗﺍ ﻰﻧﺍﻭﺍﺮﻓ ﻰﻣ ﺩﻮﺷ.ﺮﺑﺎﻨﺑا ﻦﯾ ﯽﯾﺎﺳﺎﻨﺷ ﻮﻋا ﻞﻣ پاتوژن و ا ﯽﻨﻤﯾ زا در جنس ﺮﺑو ﻼﺳ ﻪﺑ ﻮﻨﻋان راهگشای ﺖﻬﺟ ﺮﺘﻨﮐل ا ﻦﯾ ﻞﻀﻌﻣ ﺪﻬﺑا ﯽﺘﺷ ﺮﻄﻣح ﺪﺷﺎﺑﯽﻣ. هدف: با توجهبه اهمیت جهش هدفدار در شناسایی ساختار ژنوم و وجود رو شهای متعدد جهت دست یابی به این هدف، روش Overlap Extension PCR به عنوان یک تکنیک اصلاح شده جهت حذف و جایگزینی ژن هدف معرفی م یشود. روش کار: جهت انجام این تحقیق، با انجام دو مرحله PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، قطعات بالادست و پایین دست ژن هدف از ژنوم باکتری و کاست مقاومت آنتی بیوتیکی از پلاسمیدa)+(ر pET28 ، تکثیر یافته و به یکدیگر اتصال یافتند. قطعه حاصله با استفاده از آنزی مهای محدودالاثر که توالی آنها در انتهای 5´ رایمرهای خارجی قرار داده شده است، در جایگاه اختصاصی از پلاسمید )-( pBluescriptIISK همسانه سازی شده و پس از حصول اطمینان از عدم ایجاد جهش خودبخودی در حین مراحل PCR ، با استفاده از روش الکتروپوریشن به داخل ژنوم بروسلا آبورتوس انتقال یافت. نتایج: همسانه سازی محصول PCR اتصالی که بدون بروز تغییر در توالی نوکلئوتیدی حاصل شده بود، داخل پلاسمید )-( pBluescriptIISK انجام شد و پس از انتقال الکتریکی پلاسمید به ژنوم بروسلا آبورتوس، طی عمل ریکامبینیشن باعث جهش در ژن مورد نظر گردید. نتیجه گیری نهایی: نتایج این مطالعه نشان م یدهد که Overlap Extension PCR یک تکنیک بهینه و اصلاح شده به منظور ایجاد جهش در ساختار ژنوم باکتری بوده و به راحتی م یتواند در خانواده بروسلا استفاده گردد.

Keywords:

بروسلا آبورتوس , جهش , Overlap Extension PCR