جداسازی، تخلیص و بررسی خاصیت باکتری کشی کال پروتکتین از نوتروفیلهای خون گاو

زمینه مطالعه: نوتروفی لهای گاو پپتیدهای یاخت هکشی تولید م یکنند که باعث از بین بردن میکروارگانیس مهای قارچی و باکتریایی از جمله عامل ماستیت م یشوند. هدف: استخراج و تخلیص پروتئین P23/P7 گاوی و بررسی فعالیت ضد باکتریایی آن علیه باکتر یهایStaphylococcus aureus، Aeromonas hydrophila و Yersinia ruckeri بود. روش کار: ابتدا یاخت ههای نوتروفیل گاو توسطروش رسو بدهی با دکستران و سانتریفیوژ روی فایکول از سایر یاخت ههای خون سالم جداسازی گردیدند. سپس زند همانی آنها با کمک تریپان بلو تعیین و پس از خرد کردن آنها با سونیکاتور مقدار پروتیئ نهای تام سیتوزولی توسط سانتریفیوژ جداسازی شد. در مرحله بعد، پس از جداسازی به منظور تخلیص ابتدا دیالیز و سپس کروماتوگرافی تعویض یونی دو مرحل های صورت گرفت. بررسی فعالیت ضد یاخت های آ ن، با رو شهای تعیینحداقل غلظت مهار کنندگی، حداقل غلظت کشندگی و آزمون انتشار در آگار بررسی شد. نتایج: یاخت ههای نوتروفی ل با زند همانی بیشتر از 95 % جداسازی شدند. نتایج کروماتوگرافی و الکتروفورز ژل پروتئین نشان داد که پروتئین هترودیمر P23/P7 با موفقیت طی دو مرحله تخلیص شده است )مرحله اول حدود 60 % و در مرحله دوم با خلوص بیشتر از 95 %(. وزن مولکولی هر کدام از منومرهای کوچک و بزرگ به ترتیب 7 kDa و 23 تعیین شد. پروتئین تخلیص شده دارای فعالیت باکتری کشی بوده و تأثیر آن بر یرسینیا روکری ) 64 μg/ml ( بی شتر از دو باکتری دیگر بود. نتیج هگیری نهایی: پروتئین تخلیص شده در طی فرایند تخلیص فعالیت خود را حفظ م یکند. به علاوه فعالیت ضد باکتریایی نوتروفیل م یتواندناشی از پروتئین P23/P7 باشد

Keywords:

ضد یاخته , کال پروتکتین , جداسازی , نوتروفیل