حذف ژن پروزامین سنتتاز در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 بمنظور تولید سویه ضعیف شده

مقدمه: هدف از این مطالعه، انجا م حذف ژنی در باکتری برو سلا ملی تنسیس Rev1 بهمنظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، بود. بدین منظور تلاش گردید تا ژن کد کننده آنزیمپروزامین سنتتاز (per) ، یکی از ژن های درگیر در تشکیل ساختار زنجیره O از LPS دیواره باکتری، ازطریق انجام نوترکیبی هم ساخت حذف گردد.مواد و رو ش ها: نو ترکیبی هم ساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذفکه شامل ترادف نوکلئوتیدی کدکننده مقاومت آنتی بیوتیکی کانامایسین (Rkan) بهمراه تراد ف هایبالادست و پایین دست ژن per در طرفین آن بود، صورت گرفت. کاست حذف با انجام واکنش هایPCR سه مرحله ای با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ساخته شده و به منظور ساخت وکتورخودکشی، درون وکتور(-) pBluescriptIISK کلون گردید. انتقال وکتور خودکشی بدرون باکتری باروش الکتروپوریشن صورت گرفت.یافته ها: نتایج حاصل، صحت ساخت کا ست حذف و وکتور خودکشی را تأیید کرد. بهدنبال انتخاب سویه جهش یافته، حذف ژن per با انجام واکن ش های PCR با استفاده از پرایمرهایاختصاصی و تعیین توالی قطعه تکثیر یافته، مورد تأیید قرار گرفت. همچنین با مقایسه محصولواکنشهای RT-PCR انجام یافته با پرایمرهای اختصاصی از سویه های والد و جهش یافته، عدم بیانآنزیم پروزامین سنتتاز مورد تأیید قرار گرفت.بحث و نتیجه گیری: سویه حاصل یک سویه جهش یافته دارای نقص در ساختار LPSخود بوده که علاوه بر کاهش خطا در تمایز ما بین حیوان واکسینه شده و حیوان آلوده در تست هایتشخیصی، می تواند با انجام تست های ایمنولوژیکی بعنوان یک سویه کاندید واکسن مورد بررسی قرار بگیرد.

Keywords:

برو سلاملی تنسیس Rev1 , پروزامین سنتتاز , حذف ژنی , وکتور خودکشی