معصوم امرایی - کارشناس ارشد، بیوشیمی، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
مهدی زین الدینی - دکترای، بیوشیمی، استادیار، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران- نویسنده مسئول
مسعود سلیمانی - دانشیار، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
علی رضا سعیدی نیا - استادیار ژنتیک پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران

مقدمه: ایمونوتوکسین ی پروتئین هیبریدی و دارای دو بخش کاملا مجزا است که توسط رابطه های مشخصو به صورت کووالان به یکدیگر متصل هستند: یک بخش ایمنی که نقش تشخیصی و اتصال ایمونوتوکسین بهگیرنده های خاص را بر عهده دارد و یک بخش توکسینی یا سمی که نقش سیتوتوکسیک و مرگ سلولی راانجام می دهد. هدف از مطالعه حاضر، تولید ی پروتئین هیبریدی با استفاده از اتصال مولکولی توکسین دیفتری(DT) به اینترلوکین 2 انسانی (IL2) ، به منظور استفاده از آن در بیماران مبتلا به لنفوما می باشد.مواد و روش ها: پس از سنتز اولیه توالی ژنی رمز کننده پروتئین هیبریدی مذکور (IDZ: DT-IL2) ،همسانه سازی قطعه مربوطه در سیستم بیانی pET ، صورت گرفت. پلاسمید pET-IDZ تولیدی، درونباکتری (BL21(DE3 منتقل و سپس القاء گردید. در ادامه تخلیص پروتئین با استفاده از سیستمکروماتوگرافی تمایلی نیکل (Ni-NTA) انجام شد و در نهایت عملکرد پروتئین هیبریدی نوترکیب تولیدی برروی رده سرطانی K-562 که دارای گیرنده سطحی برای اینترلوکین 2 است، با استفاده از روش سنجشزیستی MTT مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفت.یافته ها: پس از تولید پلاسمید pET-IDZ ، بیان پروتئین هیبریدی نوترکیب در باکتری (BL21(DE3 ، بااستفاده از روش های الکتروفورز و وسترن بلات تأیید گردید. تخلیص پروتئین هیبریدی، خلوص بالای 95 درصدرا با استفاده از روش دانسیتومتری نشان داد. در ادامه سلو ل های K-562 با غلظ های مختلف پروتئینهیبریدی تولیدی تیمار شد. نتایج حاصله نشان داد که میزان (IC(50% برابر (10-)10 6x مولار است.نتیجه گیری: ایمونوتوکسین یا توکسین هدف گذاری شده به عنوان یکی از استراتژی های نوین درمانی بیمارانسرطانی به حساب می آیند. اولین نمونه نوترکیب این پروتئین های هیبریدی (با نام اونتاک) در سوال 1999 ازسازمان غذا و داروی آمریکا تأییدیه دریافت کرد که در آن توکسین دیفتری به اینترلوکین 2 متصل شده بود. باتوجه به اهمیت داروی مذکور، تلاش گردید این دارو در داخل کشور تولید شود. نتایج حاصل از عملکرد اولیهنمونه تولیدی بیانگر صحت نمونه است ولی لازم است آزمایشات تکمیلی و مقایسه آن با نمونه خارجی صورت پذیرد.

کلون، بیان، تخلیص، ایمونوتوکسین، دیفتری، اینترلوکین