طراحی، ساخت و انتقال سازه های ژنی جهت خاموش سازی ژن های F3′5′H و F3′H در انگور رقم شیراز

به منظور مطالعه عملکرد ژن های F3´5´H و F3´H و برهم کنش آنها در مسیر بیوسنتز فلاونوئیدها در انگور، از طریق طراحی و ساخت سازه های مناسب ایجاد کننده ihpRNA ، لاین های تراریخت حاوی سازه خاموش کننده ژن F3´H و سازه خاموش کننده هر دو ژن F3´5´H و F3´H ایجاد شدند. به این منظور، قطعاتی از دو ژن انتخاب و به صورت تکرارهای معکوس در ناقل pHANNIBAL درج و با بهره گیری از سیستم ناقل دوگانه، هر یک از سازه های تهیه شده وارد ناقل p27 mod GFP 4a شده و به اگروباکتری منتقل شدند. کالوس های جنین زای حاصل از کشت پرچم، توسط کشت توام با اگروباکتری تراریخت شدند. بیان ژن GFP در کالوس های جنین زا، پنج روز پس از تلقیح با میکروسکوپ مشاهده شد. در نهایت از کشت کالوس های جنین زای دارای سازه خاموشی ژن F3′H و سازه خاموشی همزمان F3′H و F3′5′H به ترتیب تعداد 42 و 34 لاین باززایی شدند که براساس واکنش زنجیره ای پلیمراز، 36 لاین برای سازه خاموشی ژن F3′H و 27 لاین برای سازه خاموشی همزمان F3′H و F3′5′H ، مثبت ارزیابی شدند که این نتیجه نشان از کارایی بالای روش باززایی و تراریختی مورد استفاد بود.

Keywords:

, Vitis vinifera , سازه ژنی , خاموش سازی , F3′5′H , F3′H