طراحی و ساخت پروموتر ARE توسط تکنیک های مهندسی ژنتیک

زندگی مدرن امروزی همراه با افزایش استرس های محیطی،باعث تجمع رادیکال های آزاد در بدن می شود و با افزایش روز افزون مشکلات زیست محیطی، توجه دانشمندان به مسیرهای مولکولی اکسیدانی–آنتی اکسیدانی جذب شده است.ژنوم انسانی شامل ژن های حفاظت کننده ای است که در پروموتر خود دارای توالی خاص ARE می باشند و متابولیسم القاء شده به واسطه آن یکی از رایج ترین پاسخ ها مقابل استرس اکسیداتیو می باشد. ژن های پاسخ گو در این سیستم توسط فاکتور رونویسی (NF-E2 related factor2) Nrf2 تنظیم می شوند. رده سلولی مهندسی ژنتیک شدهARE حساس به موادی است که می توانند نقش سمی در محیط ایفا کنند، مانند ROSها که باعث به راه افتادن مسیر اکسیدانی Nrf2-Keap1 می شوند. ارزشمند بودن این تحقیق، هزینه پایین و پاسخ گویی سریع می باشد. بنابراین می توان توسط روش های کلونینگ پروموتر مربوطه را ساخته و توسط تست هایی همچون لوسیفراز و MTT فعالیت آن را مورد بررسی قرار داد. به منظور ساخت این توالی ,این ناحیه ی پروموتری به صورت دو الیگونوکلیوتید دو رشته ای دارای توالی لازم برای جفت شدن با وکتور برش خورده با دو آنزیم HindIII و XhoI سفارش داده شد ( ناحیه ای از وکتور که قطعه ی ARE در آن قرار می گیرد بین دو ناحیه ی برش آنزیم های HindIII و XhoI قرار دارد ) و پس از مراحل هیبریداسیون به صورت دو رشته ی قابل اتصال در وکتور برش خورده درآمد. از وکتور حاوی ژن گزارشگر لوسیفراز (pGL4.26) تحت کنترل یک پروموتر دایمی ARE Core Promter برای ترنسفکشن رده سلولی (Huh7) و طراحی سیستمی جهت پایش سمیت عمومی ترکیبات اکسیداتیو بر سلول انسانی استفاده شده است.

Keywords:

استرس اکسیداتیو , زیست حسگر سلولی , مسیرهای مولکولی