بررسی ساختار جایگاه تراژن cry1Abدر برنج تراریخته طارم مولایی

میزان بیان تراژن و پایداری آن تحت تاثیر عواملی مثل ساختار کاست بیانی، الگوی تلفیق وساختار جایگاه تراژن قرار میگیرد. ساختار جایگاه تراژن در سازوکارهای بیان آن اهمیت دارد.در این بررسی سعی شده است با جداسازی ردیف مجاور محل تلفیق تراژن cry1Ab در برنجتراریخته طارم مولایی، ساختار جایگاه آن مشخص شود. برنج تراریخته طارم مولایی که ازتراریزش همزمان دو پلاسمید pCIB4421 و pChitIHygII تولید شده دارای الگوی تلفیق سادهبا بیان پایدار طی چندین نسل است. جهت بررسی ساختار جایگاه تراژن، ابتدا با استفاده ازآغازگرهای طراحی شده از انتهای ´ 3و ´ 5ژن مقاومت به امپیسیلین، انتهای ´ 3 ژن cry1Ab وانتهای ´ 5پیشبر PEPCبر روی پلاسمید pCIB4421و انجام پی.سی.آر، حدود محل شکستپلاسمید تعیین شد. سپس با توجه به محل احتمالی شکست برای جداسازی نواحی مجاور آن از دوراهبرد پی.سی.آر یکطرفه شامل TAIL-PCRو Splinkerette PCR استفاده شد. ردیف یابیقطعات تکثیر شده و بررسی های بیوانفورماتیک نشان داد که محل شکست در نسخه ی کامل 148نوکلیوتید بعد از انتهای ´ 3ژن مقاومت به امپیسیلین است و 1496نوکلیوتید از نواحی پاییندست محل شکست و 311نوکلیوتید از نواحی بالا دست جداسازی شد. نتایج همردیف سازی اینتوالیها با توالی پلاسمیدهای pCIB4421 و pChitIHygII و ژنوم برنج در پایگاه NCBI نشانداد که توالی پایین دست مخلوطی از قطعات پلاسمید و ژنوم برنج و توالی بالا دست نیز قطعاتناپیوستهای از توالی پلاسمیدهای منتقل شده است

Keywords:

ردیف مجاور تراژن , ایمنی زیستی , برنج تراریخته , cry1Ab