تشخیص همزمان باکتری های بیماریزای لیستریا منوسایتوژنز، اشرشیا کلی O157:H7 و جنس سالمونلا به روش multiplex PCR در سبزیجات آماده مصرف

آلودگی های باکتریایی مواد غذایی یکی از مهمترین مسایل در زمینه ایمنی مواد غذایی می باشد. لذا استفاده از روش های تشخیصی سریع و دقیق حایزاهمیت است. یکی از مهم ترین این روشها، تکنیک مولکولی PCR است که امکان تشخیص دقیق و با حساسیت بالا در مدت زمان کم، از مزایای آن است. اما در صورتیکه تشخیص چندین باکتری بیماریزا مد نظر باشد (multiplex PCR (mPCR بهترین گزینه خواهد بود. در این تحقیق از سهباکتری لیستریا منوسایتوژنز، اشرشیا کلی O157:H7 و جنس سالمونلا (سالمونلا انتریکا سرووار تیفی موریوم) که از باکتری های بیماریزای مهم منتقل شده از طریق آب و مواد غذایی هستند استفاده شد و به کاهو، که نمونه ای از سبزیجات پر مصرف در تهیه سالاد های آماده است، تلقیح و با روش mPCR بطور همزمان شناسایی شدند. بدین منظور مخلوطی از پرایمر های اختصاصی مربوط به باکتریها یعنی invA (پروتیین تهاجمی A) برای جنس سالمونلا با 284 جفت باز، prfA (پروتیین افزایش دهنده نسخه برداری از ژنهای عامل ویرولانس) برای لیستریا منوسایتوژنزبا 217 جفت باز و rfb (ژن مسیول تولید آنتی ژن O157) برای اشرشیاکلی O157:H7 با 420 جفت باز، به همراه DNA استخراج شده از مخلوط سه باکتری تلقیح شده به کاهو و سایر معرف های واکنش PCR به یک لوله واکنش، منتقل و همزمان PCR شدند. با این روش، امکان تشخیص همزمان سه باکتری بیماریزای فوق با حساسیت 1cfu/g امکان پذیر شد.

Keywords:

باکتری های بیماریزای غذازاد , سبزیجات آماده مصرف , PCR , Multiplex PCR