بهینه سازی روش استخراج RNA از گیاه فندق

فندق از خانواده Betulaceae با نام علمی Corylus avellana و یکی از مهمترین محصولات آجیلی در جهان است و به خاطر داشتن اسیدهای چرب ضروری، استرول ها ، آنتی اکسیدان ها حایز اهمیت می باشد. قسمت های مختلف این گیاه حاوی انواع مهمی از متابولیت های دارویی با اثرات ضد سرطانی و ضد میکروبی ارزشمند نظیر تاکسول می باشد. تاکسول یک دی ترپنویید است که اولین بار از درخت سرخدار و سپس از درختان دیگر مانند فندق جداسازی شد. برخلاف اثرات دارویی این گیاه ترکیبات فنولی و متابولیت های ثانویه دیگری به عنوان مشکل اصلی در استخراج RNA مناسب برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و مهندسی ژنتیک محسوب می شوند. هدف از انجام این آزمایش ، مقایسه روش های مختلف استخراج RNA از کالوس فندق بود. ازاینرو هفت دستورالعمل شامل دو روش دستی و پنج کیت تجاری از نظر کمیت و کیفیت RNA استخراج شده ، ارزیابی و مقایسه شدند. به منظور ارزیابی از اسپکتروفتومتری ، الکتروفورز ژل آگارز و واکنش RT-PCR استفاده شد. از بین روش های مورد مطالعه ، کمیت و کیفیت RNA ی استخراج شده با روش SDS و کیت Total RNA isolation نسبت به روش های دیگر مناسب تر بود. از محاسن این روش ها کوتاه بودن زمان استخراج و کم هزینه تر بودن آنها است. ساخت cDNA با استفاده از RNA های استخراج شده از طریق این دو روش با موفقیتانجام و واکنش RT-PCR باندهای مورد انتظار را تولید نمود. بنابراین به نظر می رسد این روش ها برای استخراج RNA مناسب باشد.

Keywords:

استخراج RNA , فندق , ترکیبات فنولی , الکتروفورز , اسپکتروفتومتری