بررسی تاثیر اسانس رزماری (Rosmarinus officinalis) بر روی یک گونه قارچ ساپرولگنیا درشرایط آزمایشگاهی

مقدمه: یکی از مشکلات مهم دوره انکوباسیون تخم بسیاری از گونهها از جمله قزلآلا و تاس ماهیان قارچزدگی میباشد قارچ ساپرولگنیا از عوامل اصلی قارچزدگی در تخم ماهیها بهخصوص قزلآلا و تاس ماهی ایرانی است. این قارچ به تخمهای مرده چسبیده و پس از رشد به داخل دیواره تخم نفوذ کرده و از تخم مرده به تخمهای زنده منتقل میشود و از مهمترین عوامل زیانآور به اقتصاد آبزیپروران در کشورهای مختلف تلقی میشود. فعالیت ضدقارچی اسانس رزماری علیه یک گونه قارچ ساپرولگنیا به روش مایکرودایلوشن براث مورد ارزیابی قرار گرفت. روش کار: بدین منظور ابتدا 100 گرم برگ رزماری آسیاب و به وسیله دستگاه کلونجر اسانس آن تهیه گردید. برای مطالعه رفتار رشد قارچ مورد نظر و تعیین حداقل غلظت ممانعتکنندگی از رشد (MIC (و نیز حداقل قدرت قارچ-کشی (MFC (اسانس رزماری از روش های استاندارد ماکرودایلوشنبراث (رقیقسازی در محیط مایع) استفاده شد. برای رقتسازی در لوله، ابتدا محیط سابورو دکستروز براث به میزان 5 سیسی به 11 لوله ونوجکت اضافه شد. مقدار 100میکرولیتر اسانس به 9/9 سیسی سابورو دکستروز براث در لوله اول اضافه گردید بعد از شیکر دادن لوله، مقدار 5 سیسی از لوله اول به لوله دوم و سپس به لوله بعدی و در نهایت تا لوله دهم اضافه شد در هر لوله سریالهای 2/1 رقت لوله قبلی تهیه گردید. دو لوله هم به عنوان شاهد در نظر گرفته شد. غلظتهای به دست آمده از هر اسانس در محیط کشت سابورو دست به میلیلیتر بر میکرولیتر 0/01 و 0 /03 ،0/07 ،0/15 ،0/31 ،0/62 ،1/25 ،2/5 ،5 ،10 شامل براث دکستروزآمد. رقتسازی در سه تکرار انجام شد. برای تهیه سوسپانسیون قارچی ابتدا قارچ روی محیط کشت جامد سابورو دکستروز آگار کشت دادهشد و در دمای 25 درجهی سانتیگراد به مدت 4-3 روز نگهداری شد سپس از کلنیهای رشد کرده سوسپانسیون قارچی تهیه گردید برای این کار به سطح کلنی رشد کرده در محیط جامد، مقداری سرم فیزیولوژی اضافه و بعد از مدتی با پیپت پاستور استریل از سطح محیط برداشته شد. از کلنی خالص قارچ ساپرولگنیا ایجاد شده در محیط کشت نمونه ای تهیه گردید و به سرم فیزیولوژی دارای تویین 80 اضافه شد. بعد از جداسازی اسپور، شفافیت سوسپانسیون در طول موج 520 نانومتر به 90 %رسانیده شد، که نشان دهنده وجود 10 6×1 اسپور در هر میلیلیتر بود. در نهایت به هر کدام از لوله ها مقدار 10 میکرولیتر از سوسپانسیون قارچی اضافه 24-48ساعت در انکوباتور نگهداری شد. بعد از این مدت با روش کدورت سنجی چشمی کمترین رقتی که کدورتی در آن مشاهده نشد MIC در نظر گرفته شد و از MIC و دو رقت کمتر روی محیط سابورو دکستروز آگار کشت داده شد و بعد از انکوباسیون رقتی که هیچ گونه رشدی روی محیط جامد نداشت به عنوان MFC به دست آمد. حداقل غلظت ممانعت کننده از رشد (MIC (و حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری به ترتیب 19/1±82/1 و 8/1±16/4 میکرولیتر بر میلیلیتر اندازه گیری گردید.بحث و نتیجه گیری: نتایج این تحقیق حاکی از تاثیر اسانس رزماری بر روی قارچ مورد آزمایش بود.