بررسی تاثیر اسانس رزماری (Rosmarinus officinalis) بر روی قارچ آسپرژیلوس فلاووس در شرایط آزمایشگاهی

مقدمه: استفاده از گیاه درمانی از زمانهای قدیم در تمدنهای باستان رایج بوده و امروزه نیز گیاه درمانی به صورت مختلف اعم از استفاده از فرآوردههای گیاهی یا عصارههای تام و یا اسانسهای روغنی در تمام دنیا رایج است و توجه خاصی به گیاه درمانی شده است. آفلاتوکسینها گروه بزرگی از مایکوتوکسینها میباشند که بهوسیله گونهی خاصی از جنس آسپرژیلوس بهویژه فلاووس (flavus Aspergillus (و پارازیتیکوس (parasiticus Aspergillus (تولید میشوند. اولین شیوع آفلاتوکسیکوزیس ماهی در تخم گشایی ماهی قزلآلا در سال 1960 اتفاق افتاد. در ماهی قزلآلای رنگینکمان پرورشی که با غذاهای دان آمادهشده با ترکیب تخم پنبه آلوده به آفلاتوکسینها تغذیهشده بودند تومورهای کبدی گسترش یافت.روش کار: فعالیت ضدقارچی اسانس رزماری علیه ی قارچ آسپرژیلوس فلاووس به روش مایکرودایلوشن براث مورد ارزیابی قرار گرفت. بدین منظور ابتدا 100 گرم برگ رزماری آسیاب و به وسیله دستگاه کلونجر اسانس آن تهیه گردید. برای مطالعه رفتار رشد قارچ مورد نظر و تعیین حداقل غلظت ممانعتکنندگی از رشد (MIC (و نیز حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری از روش های استاندارد ماکرودایلوشنبراث (رقیقسازی در محیط مایع) استفاده شد. برای رقتسازی در لوله، ابتدا محیط سابورو دکستروز براث به میزان 5 سیسی به 11 لوله ونوجکت اضافه شد. مقدار 100 میکرولیتر اسانس به 9/9 سیسی سابورو دکستروز براث در لوله اول اضافه گردید بعد از شیکر دادن لوله، مقدار 5سیسی از لوله اول به لوله دوم و سپس به لوله بعدی و درنهایت تا لوله دهم تکرار شد در هر لوله سریالهای12رقت لوله قبلی تهیه گردید. دو لوله هم به عنوان شاهد در نظر گرفته شد. غلظتهای به دست آمده از هر اسانس در محیط بر میکرولیتر 0/01 و 0 /03 ،0/07 ،0/15 ،0/31 ،0/62 ،1/25 ،2/5 ،5 ،10 شامل براث دکستروز سابورو کشتمیلیلیتر به دست آمد. رقتسازی در سه تکرار انجام شد.برای تهیه سوسپانسیون قارچی ابتدا قارچ روی محیط کشت جامد سابورو دکستروز آگار کشت دادهشد و در دمای 25 درجهی سانتیگراد به مدت 4-3 روز نگهداری شد سپس از کلنیهای رشد کرده سوسپانسیون قارچی تهیه گردید برای این کار به سطح کلنی رشد کرده در محیط جامد، مقداری سرم فیزیولوژی اضافه و بعد از مدتی با پیپت پاستور استریل از سطح محیط برداشته شد. از کلنی خالص قارچ آسپرژیلوس فلاووس ایجاد شده در محیط کشت نمونه ای تهیه گردید و به سرم فیزیولوژی دارای تویین 80 اضافه شد. بعد از جداسازی اسپور، شفافیت سوسپانسیون با استفاده از دستگاه 6 اسپکتروفتومتر در طول موج 520 نانومتر به 90 %رسانیده شد، که نشان دهنده وجود 10 اسپور در هر میلیلیتر بود. در نهایت به هر کدام از لوله ها مقدار 10 میکرولیتر از سوسپانسیون قارچی اضافه گردید و 24-48 ساعت در انکوباتور نگهداری شد. بعد از این مدت با روش کدورت سنجی چشمی کمترین رقتی که کدورتی در آن مشاهده نشد MIC در نظر گرفته شد و از MIC و دو رقت کمتر روی محیط سابورو دکستروز آگار کشت داده شد و بعد از انکوباسیون رقتی که هیچ گونه رشدی روی محیط جامد نداشت به عنوان MFC به دست آمد. حداقل غلظت ممانعت کننده از رشد (MIC(و حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری به ترتیب 36/0±83/0 و 44/1±16/4 میکرولیتر بر میلیلیتر اندازه گیری گردید. بحث و نتیجه گیری: نتایج این تحقیق حاکی از تاثیر اسانس رزماری بر روی قارچ مورد آزمایش بود.

Keywords:

اسانس رزماری , آسپرژیلوس فلاووس , ماکرودایلوشن براث