بررسی فعالیت ضد قارچی اسانس رزماری (Rosmarinus officinalis) علیه آسپرژیلوس نایجر در شرایط آزمایشگاهی

مقدمه: آسپرژیلوزیس نوعی از عفونتهای قارچی فرصت طلب انسان و حیوان است که توسط گونه های مختلف قارچ آسپرژیلوس ایجاد میشود. بیماری ممکن است حاصل مصرف موادآلوده به توکسین قارچ و یا واکنش آلرژیک در اثراستنشاق اسپورهای قارچ باشد. اسانسهای گیاهی مدت زمان طولانی است که جهت درمان بیماریها استفاده میشوندو در بسیاری از کشورهای پیشرفته، مواد با منشاء گیاهی نقش مهمی را در حفظ سلامت جامعه بازی می کنند. بعلاوه شناسایی این ترکیبات با فعالیت ضدمیکروبی همیشه برای دانشمندانی که به جست و جوی منابع جدید دارویی برایدرمان بیمار یهای مختلف هستند، جذاب بوده است. روش کار: در این مطالعه از اسانس گیاه رزماری جهت بررسی فعالیت ضدقارچی علیه آسپرژیلوس نایجر به روش مایکرودایلوشن براث استفاده شد. بدین منظور ابتدا 100 گرم برگ رزماری آسیاب و به وسیله دستگاه کلونجر اسانس آن تهیه گردید. برای مطالعه رفتار رشد قارچ مورد نظر و تعیین حداقل غلظت ممانعتکنندگی از رشد (MIC (و نیز حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری از روش های استاندارد ماکرودایلوشنبراث (رقیقسازی در محیط مایع) استفاده شد. برای رقتسازی در لوله، ابتدا محیط سابورو دکستروز براث به میزان 5 سیسی به 11 لوله ونوجکتاضافه شد. مقدار 100 میکرولیتر اسانس به 9/9 سیسی سابورو دکستروز براث در لوله اول اضافه گردید بعد از شیکر دادن لوله، مقدار 5 سیسی از لوله اول به لوله دوم و سپس به لوله بعدی و درنهایت تا لوله دهم تکرار شد در هر لوله 1 سریالهای 2رقت لوله قبلی تهیه گردید. دو لوله هم به عنوان شاهد در نظر گرفته شد. غلظتهای به دست آمده از و 0 /03 ،0/07 ،0/15 ،0/31 ،0/62 ،1/25 ،2/5 ،5 ،10 شامل براث دکستروز سابورو کشت محیط در اسانس هر01/0 میکرولیتر بر میلیلیتر به دست آمد (رقتسازی در سه تکرار انجام شد). برای تهیه سوسپانسیون قارچی ابتدا قارچ روی محیط کشت جامد سابورو دکستروز آگار کشت دادهشد و در دمای 25 درجهی سانتیگراد به مدت 4-3 روز نگهداری شد سپس از کلنیهای رشد کرده، سوسپانسیون قارچی تهیه گردید برای این کار به سطح کلنی رشد کرده در محیط جامد، مقداری سرم فیزیولوژی اضافه و بعد از مدتی با پیپت پاستور استریل از سطح محیط برداشته شد. از کلنی خالص قارچ آسپرژیلوس نایجر ایجاد شده در محیط کشت نمونه ای تهیه گردید و به سرم فیزیولوژی دارای تویین80 اضافه شد. بعد از جداسازی اسپور، برای تهیه سوسپانسیون قارچی با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج520 نانومتر میزان عبور نور از سوسپانسیون، مورد سنجش قرار 6 گرفت (میزان عبور نور 90 %برای به دست آوردن سوسپانسیونی با تقریبا 10 اسپور قارچی در هر میلیلیتر مورد نیاز است). در نهایت به هر کدام از لوله ها مقدار 10 میکرولیتر از سوسپانسیون قارچی اضافه گردید و 24-48 ساعت در انکوباتور نگهداری شد. بعد از این مدت با روش کدورت سنجی چشمی کمترین رقتی که کدورتی در آن مشاهده نشد MIC در نظر گرفته شد و از MIC و دو رقت کمتر روی محیط سابورو دکستروز آگار کشت داده شد و بعد از انکوباسیون رقتی که هیچ گونه رشدی روی محیط جامد نداشت به عنوان MFC به دست آمد. حداقل غلظت ممانعت کننده از رشد (MIC (و حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری به ترتیب 17/0±41/0 و 36/0±04/1میکرولیتر بر میلیلیتر اندازه گیری گردید.بحث و نتیجه گیری: نتایج این تحقیق حاکی از تاثیر اسانس رزماری بر روی قارچ مورد آزمایش بود.

Keywords:

اسانس رزماری , آسپرژیلوس نایجر , ماکرودایلوشن براث