نقش دمین C در آلفا -آمیلاز حاصل از باکتری (BKA) Bacillus sp.KR

لاتین α آمیلاز E.C.3.2.1.1 یک آنزیم اندواثر که هیدرولیز α-D(1-4) در نشاسته و الیگوساکاریدهای مرتبط را کاتالیز می کند. مطالعات کریستالوگرافی نشان داد که α -آمیلاز سه دمین C و B ،A دارد. دمین A, 8a-B/ ، هسته مرکزی آنزیم را تشکیل می دهد و شامل جایگاه فعال آنزیم است. دمین B مسیول تعیین ویژگی سوبسترایی و پایداری آنزیم می باشد، اما اطلاعات کمی درباره دمین C وجود دارد، یافتن نقش این دمین در آلفا آمیلاز پر اهمیت است. دراین مطالعه ژن a آمیلاز حاصل از باسیلوس KR 8104 تنظیم و به عنوان یک الگو در PCR استفاده شد. بر اساس داده های کریستالوگرافی، پرایمرهای اختصاصی، جهت حذف دمین C به طور کامل طراحی شدند. سپس هضم آنزیمی بر روی محصول PCR انجام شد و با سایت های برش XhoI و NcoI در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. پلاسمید نوترکیب ساخته شده به E.coli BL21 ترنسفورم شد و تحت شرایط بهینه 0/5 میلی مولار IPTG در دمای 20 درجه به مدت 2 ساعت) بیان گردید. در ادامه کار آنزیم که بطور جسم اینکلوژن بدست می آید ابتدا در شرایط دناتوره بصورت محلول بدست آورده ومطالعات فعالیت وساختاری بر روی آن به انجام خواهد رسید. همچنین احتمال تشکیل اجسام آمیلوییدی مطالعه خواهد شد.

Keywords:

آلفا آمیلاز , دمین C , اجسام آمیلوییدی