بیان و خالص سازی آنزیم پروتیاز Tobacco etch virus موتانت در باکتری E.coli

پروتیاز Tobacco etch virus (TEVp) یکدومین کاتالیتیک 22 کیلو دالتونی از پروتیین ویروسی Nia است که به دلیل اختصاص یافتگی بالا و قابلبت ایجاد N ترمینال طبیعی در پروتیین بعد از برش، بطور گسترده برای حذف تگ ها از انتهای N یا C پروتیین های نوترکیب به کار می رود. واریانت موجود از این آنزیم که در واقع یک موتانت S219V از تیپ وحشی پروتیاز TEV است، بصورت فیوژن با پروتیین اتصالی به مالتوز MBP ساخته شده و همین امر باعث بیان آنزیم به صورت یک فرم محلول می شود. این پروتیین فیوژن در شرایط in vivo خودش را برش داده که این امر باعث حذف قسمت MBP و تولید دومین فعال کاتالیتیک پروتیاز TEV با یک تگ پلی هیستیدین در N ترمینال می شود پروتیاز TEV حاوی تگ حاصل توسط ستون های کروماتوگراقی تمایلی حاوی فلز خالص سازی می شود. در نهایت خلوص آنزیم بدست آمده توسط روش SDS-PAGE حاوی تگ حاصل توسط ستون های کروماتوگراقی تمایلی حاوی فلز خالص سازی می شود. در نهایت خلوص آنزیم بدست آمده توسط روش SDS-PAGE بررسی شد و با استفاده از تکنیک وسترین بلاتینگ تایید گردید. در این مطالعه، یک روش ساده برای تولید مازاد و خالص سازی یک فرم حلال از پروتیاز TEV در Bl21 E.coli ارایه شده است.

Keywords:

پروتیاز , TEV , تولید , خالص سازی