سنتز و همسانه سازی ژن کدکننده پروتیین شیرین برازیین

امروزه مشکلاتی که جذب ساکارز برای سلامتی افراد به وجودآورده، تقاضا برای شیرین کننده های طبیعی دارای مزه مطلوب تر و جذب کمتر ازجمله پروتیین های شیرین را افزایش داده است. در میان آنها برازیین به واسطه شیرینی قوی، منشاء طبیعی و پایداری مطلوب جایگزینی مناسب برای ساکارز محسوب می شود. برازیین از میوه گیاه آفریقایی Pentadiplandra brazzeana Baillon که تولید تجاری آن در مقیاس بالا غیرعملی است، جدا شده است. بنابراین تولید تجاری وسیع این پروتیین نیازمند بیان آن در یک سیستم هترولوگوس ازطریق تکنولوژی DNA نوترکیب است. در این پژوهش باتوجه به در دسترس نبودن ژنوم گیاه P. brazzeana سنتز مصنوعی ژن برازیین با استفاده از تکنیک های Assembly PCR و SOEing PCR انجام شد. ابتدا توالی اسیدآمینه ای پروتیین برازیین با سرور Emboss Backtranseq بر اساس کدون های ترجیحی ذرت به توالی 162 نوکلیوتیدی ترجمه شد. سپس با استفاده از 6 آغازگر هم پوشان طی 5 واکنش متوالی PCR توالی کامل ژن برازیین سنتز شد. نتایج حاصل از واکنش PCR صحت کار را نشان داد. سپس قطعه حاصله در وکتورهای بیانی گیاهی pBI121 با پیشبر عمومی CaMV35S و پیشبر اختصاصی بذر Napin کلون شد و نتایج تعیین توالی صحت قطعه سنتزی کلون شده را تایید کرد.

Keywords:

برازیین , ژن سنتتیک , شیرین کننده پروتیینی , pBI121