استفاده از الکتروفورز دو بعدی برای شناسایی پروتیین های مرتبط با تمایز سلول های بنیادی پوست

باتوجه به اهمیت پروتیین ها در عملکرد و تمایز سلول ها، براى شناخت بهتر پدیده تمایز مى توان به بررسى تغییرات در بیان پروتیین (پروتیومیکس) پرداخت و الکتروفورز دوبعدی با قدرت تفکیک زیاد ابزار پایه ی پروتیومیکس است و تجزیه ی هم زمان هزاران پروتیین را امکان پذیر می سازد. ما در تحقیق پیشین سلول های بنیادی پوست انسانی را در محیط برون تن جداسازی و کشت داده و آنها را در مجاورت فاکتورهایتمایزی مناسب به سلول انسولین ساز تمایز دادیم و سلول های حاصله در پاسخ به تحریک گلوکز به صورت وابسته به غلظت، انسولین و پپتید C- تولید و ترشح نمودند. در مطالعه حاضر تکنیک الکتروفورز دو بعدی برای بررسی تغییرات بیان پروتیین در سلول های پیش ساز SKP و تمایز یافته IPC به کار گرفته شد. نتایج به دست آمده نشان داد که الگوی پروتیینی SKP ها، از نظر تعداد نقاط و میزان بیان پروتیین با الگوی پروتیینی IPC های تمایز یافته از آنها متفاوت است. در این مطالعه، پس از هم ترازی نقاط توسط نرم افزار و مطابقت دادن آن ها 907 نقطه در دو گروه SKP ها و IPC های تمایز یافته از آن ها به کمک نرم افزار و با تایید چشم قابل تطابق تشخیص داده شدند. از 907 نقطه انتخاب شده، 100 نقطه مشخص شدند که در SKP ها نسبت به IPC ها بیان بیشتری داشتند و 439 نقطه مشخص شدند که در IPC ها نسبت به SKP ها بیان بیشتری داشتند. از 100 نقطه ای که در SKP ها بیان بیشتری داشتند حدود 90 % در محدوده pH سه تا شش قرار داشتند. این نقاط از نظر وزن مولکولی تقریبا پراکندگی یکنواختی را نشان دادند. از 439 نقطه ای که در IPC ها بیان بیشتری داشتند حدود 82 % در محدوده pH پنج تا هشت قرار داشتند. این نقاط از نظر وزن مولکولی نیز در محدوده ی خاصی تراکم بیشتری داشتند به طوری که حدود 90 % از این نقاط در محدوده وزنی 30 تا 91 کیلو دالتون قرار داشتند. به طور کلی نتایج به دست آمده در این بخش نشان دادند که الگوی پروتیینی SKP های به دست آمده از فوراسکین انسانی، در روند تمایز به IPC دستخوش تغییراتی شد. سلول های تمایز یافته که از نظر فنوتیپ، مارکرهای سلولی و فعالیت ترشحی ماهیت سلول های بتای انسولین ساز از خود نشان می دهند قادرند به عنوان یک کاندید جدید در سلول درمانی دیابت مد نظر قرارگیرند

Keywords:

الکتروفورز دوبعدی , پروتیومیکس , تمایز , سلول های بنیادی پوست