میترا عشایری پناه - گروه میکروبیولوژی دانشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه شهید بهشتی
فرشته افتخار - دانشیار،گروه میکروبیولوژی دانشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه شهید بهشتی
بهرام کاظمی - استاد گروه بیوتکنولوژی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
محمد مهدی فیض آبادی - استاد گروه میکروب شناسی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران

از آنجا که تعداد زیادی از جمعیت جهان به صورت نهفته با باسیل سل (Mycobacterium tuberculosis) آلوده هستند، واکسن هایی که سل نهفته را مورد هدف قرار بدهند تاثیر قابل توجهی در کنترل شیوع جهانی سل خواهند داشت. در این پژوهش ابتدا آنالیزهای بیوانفورماتیک روی یک پروتئین مایکوباکتریایی مربوط به فاز نهفته عفونت به نام Rv1733c انجام شد و پیش بینی شد که Rv1733c یک پروتئین غشایی با تعداد زیادی اپیتوپ های سلول B و T است که آن را کاندیدی مناسبی برای تولید واکسن می سازد. سپس، ژن rv1733c از H37Rv M. tuberculosis به صورت شیمیایی سنتز شد، در پلاسمید pTG19-T قرار داده شد و پلاسمید نوترکیب حاصل به E. coli Top10 ترنسفورم شد. پس از تایید توسط برش آنزیمی و توالی یابی، قطعه DNA مورد نظر به پلاسمید pET23a(+) منتقل و در (E. coli BL21 (DE3 بیان شد. پروتئین بیان شده بصورت باندی با وزن ملکولی تقریبی kDa 24 در ژل SDS-PAGE مشاهده شدکه توسط آنتی بادی علیه دنباله هیستیدینی آن، باندی با اندازه مشابه در آنالیز وسترن بلات آشکار شد. در نهایت خالص سازی پروتئین با استفاده از یک کیت کروماتوگرافی تمایلی برای دنباله هیستیدینی صورت پذیرفت.

Rv1733c, Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli, همسانه سازی و بیان, تخلیص پروتئین