اثر انجماد با رقیق کننده های مختلف بر نسبت جنسیت اسپرم گاو هلشتاین با تکنیکReal-time qPCR

انجماد به همراه تلقیح مصنوعی گام سریع در بهبود ژنتیکی دام در سراسر جهان در طول هزاره گذشته برداشته است. در طی انجماد، خسارت به پروتئین و DNA که ممکن است به مرگ سلولی منجر شود، دیده میشود. از مهمترین عوامل موثر در انجماد منی، محتوا و نوع رقیق کننده برای اسپرم قبل از انجماد میباشد. با توجه به اینکه انجماد موجب تغییر در نسبت جنسی اسپرم میشود، این تغییر در نسبت جنسی ممکن است بدلیل استفاده از رقیق کننده ها یا تحت تاثیر پردازش و بسته بندی منی طی فرایند انجماد حاصل شود. رقیق کننده های مورد استفاده در این پژوهش رقیق کننده پایه تریس با زرده تخم مرغ و آندرومد است. پژوهش حاضر به منظور بررسی اثر انجماد با استفاده از دو رقیق کننده تریس-زرده تخم مرغ و آندرومد بر نسبت اسپرماتوزوئیدهای حامل کروموزوم X و Y انجام گرفت. پس از رقیق کردن نمونه ها، انجماد صورت گرفت، پس از طی 2 هفته، یخ گشایی انجام شد، به منظور شستشوی منی و حذف سلولهای مرده از تکنیک Swim up استفاده شد، سپس از اسپرم بدست آمده از تکنیک Swim up، استخراج DNA به روش بهینه یافته نمکی انجام گرفت. پس از استخراج DNA، real-time PCR برای تکثیر قطعات 90، 89، 79 جفت بازی به ترتیب برای ژنهای PLP، SRY، PAR با استفاده از جفت آغازگرهای اختصاصی انجام گرفت و آنالیز آماری با استفاده از آزمون انجام گرفت و نسبت جنسیت محاسبه شد که نشان داد، انجماد منی با استفاده از رقیق کننده تریس- زرده تخم مرغ منجر به افزایش معنیدار ژن SRY و کاهش معنیدار ژن PLP شد /05 0P < ، اما نتایج حاصل از افزودن آندرومد منجر به کاهش معنیدار ژن SRY و افزایش معنیدار ژن PLP شد .( P <0/05)

Keywords:

انجماد , نسبت جنسیت , رقیق کننده , گاو هلشتاین