بررسی تاثیر جنیستئین بر میزان بیان miRNA-۱۳۲ در رت های دیابتی اواریکتومی شده

میکرو RNA یکRNAکوچک غیر کدونی است که حاوی ۲۵-۱۸ نوکلئوتید است و در طول تکامل بسیار محافظت می شود، بیان ژن را پس از رونویسی از طریق تعامل خاص ژن های هدف تعیین می کند و در بسیاری از فرایندهای بیولوژیکی نقش دارد.miRNA نه تنها یک ژن واحد را تنظیم می کند، بلکه بر روی شبکه های ژنی وابسته به عملکرد نیز عمل می کند و در نتیجه شبکه های نظارتی ژنتیکی پیچیده می شود. هدف از تحقیق حاضر بررسی تاثیر جنیستئین بر میزان بیان miRNA-۱۳۲در رت های دیابتی اواریکتومی شده است. مطالعه تجربی حاضر ازنوع مطالعات مداخله ای علوم پایه بوده و به منظور بررسی تاثیرنروپروتکتیو جنیستئین بر میزان بیان miRNA-۱۳۲ رت های دیابتیک اواریکتومی شده انجام شده است. بدین منظور ۴۰ سر رت ماده نژاد ویستار با محدوده وزنی((۲۵۰-۲۰۰ گرم، از حیوان خانه دانشگاه علوم پزشکی تبریز، ایران خریداری شد، تمامی رت ها در شرایط کنترل شده(دما۲۲-۲۴C۰ با ۱۲:۱۲ ساعت چرخه ی نور وتاریکی) نگهداری می شدند و رژیم غذایی خوراکی استاندارد و آب ad libitum به مدت یک هفته دریافت می کردند. و بعد از ۱ هفته، رت ها به طور تصادفی به ۴ گروه ۱۰ نفره تقسیم شدند: گروه اول: sham،گروه دوم:)OVXاواریکتومی دوطرفه)، ،گروه سوم:(OVX.D ( OVX + Diabetes،گروه چهارم: (OVX + Diabetes + Genistein).OVX.D.G قبل از شروع آزمایش تمام حیوانات به جز گروه شم تحت اواریکتومی دو طرفه قرار گرفتند. سپس حیوانات با کتامین((۵۰mg/kg و زایلازین((۸mg/kg بیهوش شدند و بافت نخاع در قطعات کمری برای اندازه گیری بیان ژن های مربوطه جدا شد. مطالعاتqPCR برای سنتز cDNA از miRNA-۱۳۲ روش مورد استفاده ما روش primer-extension مورد بوده ، در این روش در مرحله اول به وسیله آنزیم poly(A) polymerase به مولکول microRNA از طرف ۳ پرایم دم پلی آدنین اضافه شده ، در مرحله بعد با اضافه کردن oligodT adaptor primer و Reverse Transcriptase مولکول DNA ساخته شد.برای انجام PCR کمی بر روی mRNA و microRNA از روش Real-Time PCR استفاده شد در این مورد از رنگدانه فلورسانس سایبرگرین استفاده شد .نتایج نشان داد که بیانmiRNA-۱۳۲ در گروه اواریکتومی دیابتیک((OVX.Dia در مقایسه با گروه شم((SHAM و گروه اواریکتومی دیابتیک تیمارشده با جنیستئین ((OVX.Dia.G کاهش یافته بود واز لحاظ آماری اختلاف معنی دار داشت ولی مقایسه بقیه گروه ها تفاوت معنی داری درمیزان بیانmiRNA-۱۳۲نشان نداد. و هرچند جنیستئین باعث افزایش بیان miRNA-۱۳۲ در گروه اواریکتومی دیابتیک تیمار شده با جنیستئین نسبت به گروه اواریکتومی دیابتیک گردید ولی این اختلاف معنی دار نبود.

Keywords:

miRNA-۱۳۲ , جنیستئین , اواریکتومی , دیابت