تخلیص کپسول پلی ساکاریدی پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات هموفیلوس آنفولانزا تیپ b سویه Atf2 از کشت حاصله در بیوراکتور و کونژوگاسیون آن با توکسوئید کزاز و بررسی پایداری محصول کونژوگه از نظر PH

مقدمه:هموفیلوس آنفولانزا تیپ b باکتری گرم منفی،کپسولدار و از عوامل مهم بیماری مننژیت درکودکان 5-2 سال در جهان می باشد.عامل ویرولانس این باکتری کپسول پلی ساکریدی می باشد که از قندهای 5 کربنه از جنس پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات تشکیل شده است.واکسن های کونژوگه شده با حامل پروتئینی در افزایش ایمنی زایی این واکسن ها بسیار موثر می باشد. روش ها: دراین مطالعه Hib(هموفیلوس آنفولانزا تیپ b) سویه ی Atf2 جدا شده از یک کودک مبتلا به مننژیت در فرمانتور حاوی محیط Giolitti-Cantoni broth(GC broth) کشت داده شد.آنتی ژن پلی ساکاریدی پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات (PRP یا Polyribosylribitolphosphate)پس از تخلیص با استفاده از روش های مختلف تخلیص شده و پس از عبور از فیلتر 0/25 میکرومتری با توکسوئید کزاز(Tetanus toxoid یا TT) به عنوان یک حامل پروتئینی در جهت افزایش ایمنی زایی واکسنHib،کونژوگه گردید. یافته ها:مقدار PRP تخلیص شده موجود در محصول کونژوگه 500 میکروگرم از 10باکتری در هر میلی لیتر تخلیص شد.مقدار پروتئین و اسید نوکلئیک موجود در PRP تخلیص شده طبق مصوبات سازمان جهانی بهداشتWorld Health Organization(WHO) زیر 1 درصد بود. طی انجام کروماتوگرافی با استفاده از روش ژل فیلتراسیون از 100 فراکسیون جمع آوری شده فراکسیون های 86-72 دارای میزان جذب بالاتری نسبت به سایر فراکسیون ها بوده لذا جهت پروسه ی کونژوگاسیون مورد استفاده قرار گرفت.پس از استفاده از Sodium Deoxy cholate(DOC)جهت بررسی میزان PRP کونژوگه شده مشخص شده که مقدار PRP موجود درمحصول کونژوگه 2694 ماکروگرم در هر میلی لیتر می باشد که طبق محاسبات انجام گرفته میزان بازیافتPRP (RecoveryPRP ) موجود در محصول کونژوگه 98% بود. نتیجه گیری:روش تخلیص PRP و کونژوگاسیون آن با حامل پروتئینی توکسوئید کزاز(Tetanus Toxoid یا TT) جهت افزایش ایمنی زایی روشی مقرون به صرفه و عملی با خلوص بالاست که می توان جهت تولید واکسن Hib با حجم بالا(scale up) استفاده کرد.

Keywords:

هموفیلوس آنفولانزا , کروماتوگرافی , کونژوگاسیون , توکسوئید کزاز