مریم سعادت - گروه بیوتکنولوژی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز

نوروتروفین ها خانواده ای از پروتئین ها هستند که میزان بقاء تمایز و مرگ جمعیت های مختلفی از نورون های دوپامینرژیک، حسی و حرکتی را تنظیم می کنند. NT4 یکی از اعضای خانواده نوروتروفیک می باشد که در سلول های گلیال سیستم اعصاب محیطی و مرکزی بیان می شود. این نوروورفین در بیان ژنی بقا و تمایز رده های مختلف نورونی شرکت دارد. با توجه به نیاز به این فاکتور نوروتروفیک در فعالیت های ژن درمانی برآن شدیم با ساب کلونینگ آن زمینه را برای دسترسی بیشتر به آن فراهم کنیم. روش: در این تحقیق ابتدا توالی نوکلوتیدی ژن NT4 که بروی وکتور حامل Pcmv-sport6 قرار داشت از سایت استخراج گردید و برای سفارش به شرکت open biosystems فرستاده شد. سپس ژن مورد نظر طبق پروتکل استخراج و پس از تائید برای فرآیند الحاق با کتور بیانی pEGFP-N آماده شد. به منظور تکثیر ترانسفورمیشن پلاسمید در باکتری DH5 Alpha انجام شد. جهت بررسی مستقیم کلونی ها از روش کلونی -PCR استفاده شد. بعد از اینکه پلاسمید نوترکیب استخراج گردید و پس از الکتروفورز آن روی ژل آگاروز با انجام هضم آنزیمی و سکانس وجود ژن مورد نظر در وکتور بیانی pEGFP-N1، تائید گردید. یافته ها: آنالیز آنزیمی و سکانسینگ نشان داد پالسمید ژن مورد نظر حاوی توالی صحیحی بوده و تطابق کامل با توالی ژن مورد نظر در بانک ژن دارد. نتیجه گیری: این پلاسمید به دلیل ساختار صحیح جهت انتقال به سیستم یوکاریوتی و ارزیابی بیان مناسب می باشد.