زیر همسانه سازی، بیان و تخلیص آنتی ژن کایمر چنداپی توپی علیه گونه های بیماریزای شیگلا

زمینه و هدف: شیگلوز، عفونت حاد رودهای، یکی از مشکلات بهداشت جهانی است که توسط گونه های بیماریزای جنس شیگلا در انسان اتفاق میافتد. تولید یک واکسن مقرون به صرفه و محافظت کننده علیه گونه های بیماریزای این باکتری میتواند تاثیر قابل توجهی بر سلامت عمومی داشته باشد. هدف از این تحقیق، زیرهمسانه سازی ژن کدکننده یک پروتئین چند اپیتوپی در وکتور بیانی pET32a (+)، بیان آن در میزبان بیانی E. coli BL21 (DE3) و همچنین تخلیص و تائید این پروتئین نوترکیب چند اپی توپی میباشد. مواد و روشها: تکثیر قطعه ژنی موردنظر، که در داخل وکتور pET28a(+) قرار داشت، به کمک واکنش PCR صورت گرفت. قطعات تکثیر شده و نیز وکتور pET32a (+) با استفاده از دو آنزیم محدود کننده Hind III و EcoR I به صورت جداگانه بریده و سپس طی فرایند الحاق به هم متصل شدند. وکتور نو ترکیب pET32a (+) حاوی قطعه ژنی موردنظر به درون میزبان بیانی E. coli Bl21 (DE3) منتقل و بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از IPTG القاء گردید و پروتئین موردنظر به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص شد. و درنهایت برای تائید بیان پروتئین نوترکیب از روش لکه گذاری وسترن استفاده شد. نتایج: صحت زیرهمسانه سازی ژن مورد نظر با استفاده از واکنش PCR تائید شد. آنالیز بیان ژن نشان داد که پروتئین مورد نظر بیان مناسبی دارد .(300 µg/ml) آنالیز وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضد دنباله هیستیدینی نیز بیان پروتئین نوترکیب را تائید کرد. در آخر، با استفاده از ستون نیکل پروتئین موردنظر تخلیص گردید. تیجه گیری: در این تحقیق با توجه به تائید شدن پروتئین نوترکیب چند اپی توپی به روش وسترن بلات، این پروتئین نوترکیب چند اپی توپی با توجه به داشتن اپی توپهای اصلی آنتیژنهای مشترک بین گونه های بیماریزای جنس شیگلا میتواند کاندید واکسن مناسبی برای پیشگیری از عفونت توسط گونه های بیماریزای جنس شیگلا مورد بررسی قرار گیرد

Keywords:

شیگلا , شیگلوز , پروتئین نوترکیب , واکسن چند اپیتوپی