بهینه سازی روشی جهت استخراج DNA از خون طیور و مقایسه آن با روش های معمول استخراج DNA

هدف: امروزه استخراج DNA مهمترین گام در تحقیقات مولکولی از جمله PCR، تعیین توالی اسیدهای نوکلئیک و کلونینگ است . برای استخراج DNA بر حسب نوع سلول و کاربرد مورد نظر، روش های مختلفی ابداع شده است . روش های مذکور از اصول یکسانی تبعیت می کنند که شامل رسوب دادن و حذف مرحله به مرحله ناخالصی ها و در نهایت استخراج DNA است . با توجه به رشد صنعت طیور در ایران و افزایش توجه به مطالعات ملکولی در زمینه بیماری ها و سیستم ایمنی طیور، بهینه سازی استخراج DNA پرندگان هدف اصلی این مطالعه بوده است . مواد و روش کار: در این مطالعه کارایی روش های استخراج DNA با استفاده از فنل - کلروفرم- ایزوامیل الکل ، رسوب نمکی و ستون های تجاری برای 150 نمونه خون طیور مورد ارزیابی قرار گرفتند. جهت بهبود استخراج DNA ، در روش رسوب نمکی تغییراتی ایجاد شد. این تغییرات شامل کاهش حجم خون مورد استفاده، افزایش میزان SDS در محلول لیز کننده گلبولهای سفید و افزایش محلول دناتورهکننده پروتئین ها است . در نهایت کیفیت و کمیت DNA استخراجی به کمک الکتروفورز مشخص شد. نتایج و بحث : DNA استخراجی در هر دو روش فنل - کلروفرم- ایزوامیل الکل و رسوب نمکی کیفیت و کمیت مناسبی را دارا بود. علی رغم کارایی بالای روش استخراج DNA به کمک فنل ، معایبی نیز در این روش به چشم می خورد. روش فنل - کلروفرم- ایزوامیل الکل در تعداد بالای نمونه با توجه به خطرات و محدودیت های استفاده از فنل چندان مناسب نیست . استفاده از فنل خطراتی دارد که لازم است همواره زیر هود شیمیایی کار شود و پسماندهای آن به طور مناسب طبق شرایط ایمنی زیستی آزمایشگاه ها حذف شوند. با وجود این در استفاده از روش ستون تجاری به ویژه در نمونه های حاوی لخته نیز مشکلاتی وجود دارد. بالا بودن میزان پروتئین پس از لیز سلولهای خونی باعث می شود تا منافذ فیلتر بسته شده و در نتیجه محصول بسیار کمی به دست آید. نتایج به دست آمده از این مطالعه نشان داد که روش فنل -کلروفرم – ایزوامیل الکل و استفاده از ستون های تجاری در استخراج DNA از خون طیور در مجموع مزیت کمتری نسبت به روش رسوب نمکی دارند.

Keywords:

استخراج DNA , طیور , فنل , ستونهای تجاری , رسوب نمکی