جستجوی مایکو باکتریوم بویس در عقده لنفاوی با استفاده از تکنیک PCR

مقدمه و هدف: سل گاوی با عامل مایکوباکتریوم بویس یک بیماری مزمن گرانولوماتوز است که عمدتا عقده های لنفاوی و بافت ریه را درگیر می کند و در مواردی به انسان نیز انتقال می یابد. از روش های تشخیص احتمالی بیماری بررسی تغییرات هیستو پاتولوژیک و همچنین مشاهده باسیل اسید فاست از طریق رنگ آمیزی زیل نیلسون می باشد اما جهت تشخیص قطعی بیماری جداسازی باکتری از طریق کشت نیاز است که چندین هفته طول می کشد. در این مطالعه با استفاده از تکنیک PCR به عنوان جایگزینی مطمئن و سریع برای کشت ، وجود عامل بیماری در عقده لنفاوی دنبال می شود. مواد و روش کار: ابتدا تعداد 46 نمونه بافت از عقده لنفاوی پیش کتفی و مدیاستینال گاوهای ماده کشتار شده در شهرستان های استان خراسان شمالی تهیه شد. بعد از انتقال نمونه ها به آزمایشگاه استخراج DNA با استفاده از روش گوانیدین سیلیکاژل انجام گرفت و برای تایید صحت آن از آگارز 1% استفاده شد. سپس با استفاده از پرایمرهای الیگونوکلئوتیدی اختصاصی جهت تکثیر جایگاه IS6110 در ژنوم مایکوباکتریوم بویس و برنامه حرارتی سه مرحله ای قطعه bp163 در نمونه مثبت تکثیر گردید ودر مرحله بعد محصولات واکنش PCR با استفاده از ژل آگارز 2% الکتروفورز شدند. نتایج و بحث : بعد از انجام نمونه برداری صحیح و استخراج DNA از نمونه ها وجود DNA در 46 نمونه با استفاده از ژل آگارز 1% مورد تایید قرار گرفت و بعد از انجام واکنش PCR برای 46 نمونه ، در یک مورد ازنمونه ها قطعه 163 bp تکثیر شده و بر روی ژل آگارز مشخص گردید که نشان دهنده وجود مایکوباکتریوم بویس در نمونه مورد نظر میباشد. قابل ذکر است که این نمونه در بازرسی کشتارگاهی ضایعات کالبد گشایی مربوط به سل را دارا بوده است . بنابراین می توان ازتکنیک PCR به عنوان یک روش تشخیصی مطمئن و سریع جهت تشخیص سل ودر مراحل اولیه بیماری استفاده نمود

Keywords:

مایکوباکتریوم بویس , PCR