جهش زایی ، کلون کردن و تعیین ترادف بازی ژن آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس در اشرشیاکلی

زمینه: آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس (PA) پروتئینی با خاصیت اتصال به گیرنده های سطحی سلول های بدن انسان می باشد ولی در سطح سلو ل های سرطانی گیرنده اختصاصی uPA (Urokinase plasminogen activator) ایجاد می-شود که این پروتئین قدرت اتصال به آن را ندارد. هدف از انجام این تحقیق تغییر جایگاه اتصال موجود بر روی PA با جهش زایی مستقیم می باشد که این پروتئین فقط بتواند به سلول های سرطانی متصل گردد. مواد و روش ها: در طی این تحقیق پلاسمید pMNA1 حاوی ژن PA از B.subtilis حاوی این وکتور استخراج و با استفاده از روش واکنش زنجیره ای پلی مراز SOE ، جهش هدفدار بر روی ژن PA صورت پذیرفت. قطعه حاصله بطور مستقیم بر روی ناقل PTZ57R کلون و با استفاده از روش cacl2 به E.coli سویه DH5α انتقال یافت و وجود ژن و جهش بر روی آن بوسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین ترادف بازی مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: قطعه ژنی PA با روش PCR جداسازی و بر روی آن جهش هدفمند صورت پذیرفت. از انتقال محصول PCR جهش یافته بر روی وکتور pTZ57R پلاسمیدی با اندازه 1/5 بدست آمد که این اندازه با روش هضم آنزیمی ثابت شد. سپس وجود ژن توسط PCR و جهش بر روی ژن توسط تعیین ترادف بازی تایید گردید. نتیجه گیری: سرطان مشهور به بیماری مرگ آور است. یکی از روش های درمان سرطان استفاده از توکسین های باکتریایی است لذا با استفاده از پروتئین تغییر یافته PA که فقط به سلول های سرطانی متصل می گردد، می توان امیدی تازه در درمان سرطان ایجاد کرد.

Keywords:

جهش زایی , آنتی ژن ایمنی بخش , باسیلوس آنتراسیس