تشخیص هیستیدین اساسی در عمل کاتالیتیکی آنزیم فسفاتیدات فسفوهیدرولاز غشایی کبد موش صحرایی نر

سابقه و هدف: آنزیم فسفاتیدات فسفوهیدرولاز (PAP) باعث تبدیل اسید فسفاتیدیک به د یآسیل گلیسرول و فسفات معدنی (Pi) می شود. دو فرم مختلف از آنزیم PAP در سلولهای کبدی م وش صحرایی گ زارش شده است ، یکی (PAP(1 که در متابولیسم فسفولیپیدها و گلیسرولیپیدها و دیگری (PAP(2 که در پدیده Signal transduction نقش دارد. (PAP(2 در موش صحرایی دارای دو ایزوفرم (PAP(2a و (PAP(2b میباشد. در این مطالعه وجود هیستیدین اساسی در آنزیم (PAP(2b مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روشها: با استفاده از n اکتیل گلوکوزید، غشای سلولهای کبدی موش صحرایی حل گردید و (PAP(2b طی چندین مرحله ی کروماتوگرافی تخلیص گردید. ثابت های کینتیکی بر اساس مدل کینتیک رقت سطحی تعیین گردیدند. جهت تعیین خلوص، تعداد و وزنزیرواحدهای آنزیمی از روش الکتروفورز ناپیوسته در حضورSDS با ژل پلی اکریل آمید 10 درصد استفاده گردید. تعداد مول هیستیدین موجود در یک مول آنزیم با استفاده از مشتق N- کربتوکسی هیستیدین محاسبه شد. نتایج: (PAP(2b تخلیص شده فعالیت ویژ های معادل 7350mU/mg protein داشت. الکتروفورز (PAP(2b تخلیص شده در حضور SDS یک نوار با وزن مولکولی 43/8 کیلودالتون نشان داد . مطالعات غیرفعال سازی آنزیم به وسیله معرف دی اتیل پیرو کربنات شواهدی بر ضرورت وجود هیستیدین اساسی برای فعالیت آنزیم مهیا کرد. تعداد مول هیستیدین تعدیل شده به ازای هر مول آنزیم 6 عدد بود.نتیجه گیری: مهار آنزیم توسط دی اتیل پیرو کربنات نسبت به اسید فسفاتیدیک رقابتی بود و نشان از حضور هیستیدین در مکان فعال آنزیمداشت. احتمالا واکنش کاتالیتیکی (PAP(2b نیز می بایستی همانند سایر اعضای خانواده اش از طریق تشکیل واسطهی فسفوهیستیدنی انجام گیرد.

Keywords:

فسفاتیدات فسفوهیدرولاز , هیستیدین , دی اتیل پیروکربنات , اسید فسفاتیدیک