استخراج و ارزیابی مولکولی پروتیین های عمده غشای خارجی بروسلا آبورتوس S99

سابقه و هدف: بروسلا باکتری گرم منفی، کوکوباسیل، هوازی، درون سلولی اختیاری، غیرمتحرک و فاقد اسپور می باشد. که طیف گستردهای از حیوانات و همچنین انسان را آلوده می نماید. امروزه پروتیین های غشای خارجی (OMPs) بروسلا به عنوان ساختارهای ایمونو ژنیک جهت طراحی و تولید واکسن زیر واحدی برای پیشگیری از بروسلوزیس انسانی مورد توجه قرار گرفته اند. مواد و روش ها: پروتیین های عمده غشای خارجی از سویه صاف بروسلا آبورتوس S99 از سلول های سونیکه شده به واسطه اولتراسانتریفیگاسیون و پیش هضم آنزیمی با لیزوزیم، استخراج و به وسیله کروماتوگرافی تبادل یونی و ژل فیلتراسیون به طور خالص تخلیص شدند. مقدار کل پروتیین تخلیص شده توسط دستگاه نانودراپ اندازه گیری شد. با استفاده از SDS–PAGE، پروفایلی از پروتیین های غشاء خارجی بروسلا آبورتوس S99 به دست آمد که براساس وزن مولکولی از یکدیگر تفکیک شدند. در الگوی الکتروفورتیکی به دست آمده، پورین ها تخلیص شدند. در نهایت آزمون پیروژنی و سمیت غیر نرمال طبق پروتکل سازمان بهداشت جهانی روی نمونه های تخلیص شده انجام شد. نتایج: غلظت پروتیین های عمده غشای خارجی استخراج شده در این مطالعه برابر 6/27mg/ml بود که با توجه به الگوی الکتروفورتیک به دست آمده از SDS–PAGE، وزن مولکولی نمونه استخراج شده در محدوده ی 36-38 کیلودالتون می باشد. بر اساس وزن مولکولی محاسبه شده، این پروتیین ها در گروه پورین ها قرار می گیرند. نتیجه ی آزمون پیروژنی و سمیت غیر نرمال روی نمونه ها منفی بود. نتیجه گیری: روش به کار رفته در این مطالعه به منظور تخلیص پروتیین های عمده غشای خارجی بروسلا آبورتوس S99 با غلظت بالا روشی مناسب و کارآمد بوده و با استفاده از این روش، پورین های باکتری به صورت اختصاصی قابل استخراج می باشند. نتیجه ی آزمون پیروژنی و سمیت غیر نرمال بی زیانی مصرف آن ها را در مدل های حیوانی و مصارف انسانی تایید می نماید.

Keywords:

بروسلا آبورتوس , پروتیین های غشای خارجی باکتریایی , ارزیابی مولکولی