بهنازسادات جعفرزاده - دانشجوی دکتری، بخش میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد شیراز، دانشگاه آزاد اسلامی، شیراز، ایران
سیدمهدی سادات - استادیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
رامین یعقوبی - دانشیار، بخش تحقیقات پیوند، دانشگاه علوم پزشکی شیراز ، شیراز، ایران
اعظم بوالحسنی - انشیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

سابقه و هدف: پروتیین Nef، یکی از پروتیین های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپی توپ های حفاظت شده متعددی است که در افرادآلوده به ایدز پاسخ های ایمنی قدرتمندی علیه آنها مشاهده شده است. بنابراین، پروتیین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتیین Nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ آمیزی معکوس می باشد. مواد و روشها: توالی کدکننده پروتیین Nef از وکتور pUC19 توسط PCR تکثیر شد و الحاق آن به داخل وکتور بیانی pGEX6p2 انجام شد. این سازه طی فرایند ترانسفورماسیون به سویه باکتری E.coli BL21 منتقل شده و القای بیان پروتیین با استفاده از آنتیرپرسور IPTG صورت گرفت. تایید بیان پروتیین با استفاده از آنالیز SDS-PAGE و وسترن بلات توسط آنتی بادی ضد Nef بررسی گردید. تخلیص پروتیین با استفاده از تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. نتایج: نتایج آنالیز PCR و هضم آنزیمی وجود باند واضح حدود 648 جفت باز را روی ژل آگاروز تایید کرد که نشانگر کلونینگ صحیح ژن Nef در وکتور بیان پروکاریوتی pGEX6p2 میباشد. همچنین، وجود باند حدود 50 کیلودالتون نشانگر بیان پروتیین Nef توسط آنتیبادی منوکلونال ضد Nef در آنالیز وسترن بلات تایید شد. در نهایت، باند خالص شده پروتیین توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس به دست آورده شد.نتیجه گیری: پروتیین نوترکیب Nef بیان شده در میزبان E.coli با بازده مناسب توسط روش رنگ آمیزی معکوس تخلیص شد. پروتیین Nef در آینده به عنوان یک آنتی ژن برای طراحی واکسن پروتیینی در مقابل عفونت ویروس HIV استفاده خواهد شد.

ویروس Nef, HIV، کلونینگ، بیان و تخلیص، رنگ آمیزی معکوس، اشریشیاکل